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成脂及油红O染色
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详细内容
染色原理:
油红O是一种强脂溶剂和染脂剂,能够与甘油三酯结合形成小脂滴状,而与磷脂的结合力稍差。其染色原理主要是基于物理上的溶液作用或吸附作用。染料在细胞内脂质的溶解度于在原溶剂中的溶解度,因此染料会从有机溶剂转移到脂质中,从而实现脂肪染色。具体来说,油红O从有机试剂(如异丙醇)中分离出来,融入到细胞脂质中,这一过程类似于萃取,即溶质从一种微溶或不溶的溶液中向另一种溶解度更高的溶液中移动。
实验步骤:
1、BMSCs接种到35 mm细胞培养盘,并在含有10%FBS的DMEM培养基中进行培养;
2、待细胞贴壁并长到90%左右时,换成成脂诱导培养基进行培养(成脂诱导培养基:DMEM,10μg/ml胰岛素,1μM地塞米松,0.5mMMIBMX,0.1mM吲哚美辛);
3、3d换一次液,诱导分化14d。
4、成脂诱导14d后细胞弃去上层培养液,用PBS清洗3次;
5、 每孔加入1 mL10%中性甲醛固定30 min,PBS洗涤3次;
6、加入0.5%油红工作液,避光染色1 h;
7、异丙醇漂洗,洗去多余染料,加PBS拍照观察。
仅供科研实验用,不做其他用途!
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