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易洗脱链霉亲和素-琼脂糖
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/21 8:07:19
ee-SANUPharoseFF是将基因工程改造的链霉亲和素和琼脂糖凝胶偶联而成的亲和层析分离介质。ee意为易洗脱，即可以温和洗脱结合在介质上的生物素化物质，如生物素化抗原、生物素化抗体、生物素化蛋白、生物素化核酸等，可用于Avi-Tag融合表达的生物素化蛋白的纯化、经过标记反应后的生物素化和非生物素化物质的分离、生物素化抗原抗体固定化和重复回收利用等。
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详细内容
1 、产品介绍
ee-SANUPharoseFF是将基因工程改造的链霉亲和素（Streptavidin ，SA）和琼脂糖凝胶偶联而成的亲和层析分离介质。ee意为易洗脱（easy elution），即可以温和洗脱结合在介质上的生物素化物质，如生物素化抗原、生物素化抗体、生物素化蛋白、生物素化核酸等，可用于Avi-Tag融合表达的生物素化蛋白的纯化、经过标记反应后的生物素化和非生物素化物质的分离、生物素化抗原抗体固定化和重复回收利用等。
Streptavidin NUPharoseFF，由于链霉亲和素与生物素的超-强亲和力，温和常用的方法不能将生物素标记物质洗脱。ee-SA配基经过分子层面的设计改造，幅降低了与生物素的亲和力，同时保持了与生物素的特异性。结合在ee-SANUPharose FF填料上的生物素化物质可通过含D-生物素的缓冲液竞争洗脱，该洗脱方式温和，一般不会影响目标物的活性，洗脱液中的D-生物素可通过换液方式去除。因而通过ee-SANUPharoseFF的一步层析就可获得有活性、高纯度的生物素化物质。
2 、产品特点与技术指标
| 产品名称 | 易洗脱链霉亲和素-琼脂糖 |
| 基质 | 4%交联琼脂糖 |
| 配基 | ee-SA(易洗脱链霉亲和素) ， ≥6mg/mL |
| 粒径范围 a | 45~165 μm |
| 平均粒径 | ~90 μm |
| 载量 b | 3~6 mg/mL（生物素化 BSA） |
| 推荐工作流速 | ~150 cm/h（平衡与洗脱），15~100 cm/h（结合） |
| 流速与压力 c | >900 cm/h |
| 使用 pH | 4~10（推荐的工作 pH），3~13（再生） |
| 储存与运输 | 20%乙醇，2~8 ℃保存，2~30 ℃运输 |
注：a90%体积以上的微球在此粒径范围；bDBC10%测试条件为：D-生物素标记 BSA ，10%流穿，6 min 停留时间；c 10 cm 柱高下的测试流速。
3 、易洗脱链霉亲和素填料应用原理简介
链霉亲和素与D-生物素之间的亲和力非常高，其解离常数在10−14 mol/L 数量级，是自然界-强的非共价相互作用之一。因而常规的Streptavidin NUPharose FF填料与生物素标记物质结合后，需要在变性条件下洗脱。在该使用方式下，样品易失活，填料的性能也受影响。
ee-SANUPharoseFF填料上的ee-SA配基经过基因工程改造后，保持了与生物素的 特异性的同时，削弱了亲和力，因而可通过 D-生物素竞争洗脱（图 1），扩展了链霉亲 和素填料的应用范围。图 2 为 ee-SANUPharoseFF 纯化生物素化物质的过程，包含特异 性结合、D-生物素竞争洗脱、NaOH 再生等环节。
4 、使用方法参考
4.1 色谱柱装填
以下阐述与层析系统连接时，填料的色谱柱装填方法。
（1）需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体好做脱气处理。
填料用量计算：通过沉降定量填料体积，需要的沉降填料体积=柱体积×压缩比（也称压缩因子）。沉降体积是指填料在20%乙醇保存液中自然沉降完-全读取的稳定 体积。ee-SANUPharoseFF的压缩比为1.15。为使达到装柱比，可通过柱头下压的方法，也可以通过高流速压柱。
填料清洗：将填料悬液充分摇匀后量取相应体积，抽滤除去液体，并用约3倍填料体积的纯化水洗涤，重复3次，以除去保存液。
（4）装柱填料悬液准备：将填料转移到适当的容器中，加入适量的装柱液，制成50~75 v%的装柱填料悬液，使用前搅匀。
（5）装填前准备：在清洗干净的层析柱下端加入装柱液，以除去下垫片及层析柱下端的空气，在柱内保留少量的蒸馏水，拧紧下堵头，调整柱子使其垂直于地面。
（6）装填：将搅匀后的填料悬液一次性缓慢倒入层析柱内（必要时使用装柱器），为避免引入气泡，应使之沿层析柱内壁自然流下。将填料加入后，用装柱液将装柱器加满，拧紧装柱器上盖，将柱子与层析系统连接。
（7）压柱：使柱内填料自然沉降（或50~150 cm/h的低流速下沉降），待填料沉降完-全后（填料与液体的界面清晰），去除装柱器，装上上柱头，并将柱头下降至界面处；通过高流速（推荐流速见下表，注意柱压不超过0.3MPa），继续压柱至界面清晰稳定，标记界面稳定时的柱高。停泵，打开柱头上的阀门/堵头，关闭柱底的阀门/堵头，下压柱头至标记位置下方与压缩比对应的位置，旋紧柱头，装柱完成。装柱完成后，需用高流速平衡柱内的填料。
| 装柱条件 | ee-SANUPharose FF |
| 压缩比 | 1.15 |
| 装柱流速 | 300~600 cm/h |
4.2 柱效测定和评价
完成装柱后、使用前可通过柱效测定和评价可以确认层析柱装填质量。柱效通常用 理论塔板高度（HETP）和非对称因子（As）来评价。
4.3 平衡与上样
（1）缓冲液选择：一般选用pH6~8的结合缓冲液，常用缓冲液有10~100mM磷 酸钠缓冲液、20~200mM Tris-HCl缓冲液等，根据样品的稳定性，也可添加其他成分，如NaCl、还原剂、螯合剂等。若不确定合适的缓冲体系，在初次使用ee-SANUPharose FF时，推荐使用20mM PBS（20 mM NaH2PO4，0.15 M NaCl，调节pH 7.4）或20 mM Tris-HCl，0.15M NaCl，pH8.0作为结合缓冲液。
（2）样品处理：样品的缓冲液应与所选结合缓冲液一致。为缓冲液一致，可以在结合缓冲液中破碎细菌、或调解pH 与结合缓冲液一致、或交换至结合缓冲液（常用方法有透析、超滤、脱盐柱换液等）、或用结合缓冲液稀释2~10倍等。样品上柱前应0.45μm过滤。
（3）平衡：用结合缓冲液平衡5个柱体积，建议流速为~150 cm/h
（4）上样流速：推荐线性流速20~100 cm/h。较小的流速有利于载量的提高，可根据实际结合情况选择流速，能获得较好的效果。
（5）再平衡：上样后用结合缓冲液再平衡5~10个柱体积，或平衡至基线，洗去杂质，推荐流速为~150 cm/h。
4.3 洗脱
结合了生物素化物质的ee-SANUPharoseFF可采用温和的方式洗脱，一般在结合缓冲液中加入1-10 mM的D-生物素作为洗脱缓冲液，通过竞争的方法洗脱。
4.4 再生
（1）填料使用后需要再生，本产品耐受一定的碱性，推荐使用2~5个柱体积的 20-100 mM NaOH 溶液反向清洗柱子，进行再生，推荐流速为~150 cm/h。
（2）其他方法，比如 1-2M NaCl 、70%乙醇、30%异丙醇等，也可用于该介质的再生。
4.5 填料保存
填料的初始保存液为20%乙醇，使用过后可继续用20%乙醇保存。保存温度在2~8℃为宜，不可冻存。
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