组织总磷含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
规格：50T/48S
产品内容：
试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存（强腐蚀性，强氧化性）。
试剂二：液体 11 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×2 瓶，4℃避光保存。临用前配制，加入 10 mL 蒸馏水，溶解后再加入 5 mL 试
剂二，混匀。
标准品：液体 1mL×1 支，1mmol/L 无机磷标准液，4℃保存。
产品说明：
磷的存在形态包括无机磷与有机磷。无机磷主要指磷酸根，参与生物体内多种代谢，包括能量
代谢、核酸代谢、蛋白质磷酸化和脱磷酸化等。通过测定总磷与无机磷含量即可了解作物对磷的利
用率，进而为合理施肥提供依据。
总磷经消化后，转化成无机磷。钼蓝法是测定无机磷含量的经典方法，一定条件下，钼蓝与磷
酸根生成 660nm 有特征吸收峰的物质，通过测定 660nm 光吸收，即可计算无机磷含量，进而可计
算出组织中总磷含量。
可见分光光度计、离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水和浓硫酸。
操作步骤：
一、有机磷消化：
取带盖试管，进入精确称取约 0.1 g 组织，加浓硫酸 1.0 mL，盖紧（防止水分散失）后沸水浴
10min 左右，待溶液呈黑色或棕色时取出。稍冷后，加试剂一 200μL，充分混匀，盖紧后继续沸水
浴，直到溶液呈透明状，取出室温冷却后，加蒸馏水 3.8 mL，充分混匀；室温，10000rpm，离心
10min，取上清液，待测。
二、测定：
1. 分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 660 nm，蒸馏水调零。
2.打开水浴锅，调节温度到 40℃。
3.测定：
试剂名称（μL） 空白管 标准管 测定管
标准液 50
上清液 50
蒸馏水 500 450 450
试剂三 500 500 500
混匀后置于 40℃水浴保温 10min，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，分别记为 A 空白 管、A 标准管、A 测定管。
三、组织总磷含量计算：
总磷含量(mmol /g FW)= [C 标准液×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×V 总÷W
=0.005×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)÷W
C 标准液：1 mmol/L；V 总：上清液总体积，5 mL=0.005 L。W：样品质量，g。
注意事项：
1、试剂三需临用前配制，限当天使用。
2、测定前先用 1~2 个样品做预实验，如吸光值大于 0.8，需用蒸馏水做相应稀释。
