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技术文章
全血乳酸（Lactic Acid LD）测定试剂盒测定原理
点击次数：1826 发布时间：2025/8/14 10:04:22
全血乳酸（Lactic Acid LD）测定试剂盒测定原理
一、测定原理：
以NAD+为氢受体，LDH催化乳酸脱氢产生丙酮酸，使NAD+转化成NADH。其中PMS递氢使NBT还原为紫色呈色物，呈色物的吸光度在530nm时与乳酸含量成线性关系。
二、试剂组成及配制（50管/48样）：
蛋白沉淀剂：溶液50mL×1瓶，室温保存6个月，如有结晶，则取上清进行实验。
试剂一：酶稀释液60mL×1瓶，4℃～8℃冰箱保存6个月。
试剂二：酶贮备液0.6 mL×1支, 4℃～8℃冰箱保存6个月；用时用一次性吸头进行取样。
酶工作液的配制：临用前将试剂二（酶贮备液）和试剂一（酶稀释液）按照1︰100的体积比进行混合，现 用现配，4℃保存24小时内有效；
试剂三：显色溶液6 mL×2瓶，4℃～8℃避光保存6个月。
试剂四：粉剂×2支，短期内使用可放4℃～8℃冰箱，长期（6个月）存放请置-20℃以下。(注:粉剂量较少,可能附着于管壁或盖子上,并非空管,如使用时肉眼不可见,可将其4000转/分钟离心2分钟后使用)
显色剂的配制：取1瓶试剂三，转移1mL进入一支试剂四粉剂中, 反复颠倒离心管混匀,待粉剂溶解后，再用微量移液器将离心管中的液体转移到瓶中，再从这瓶试剂三中移出1mL到原试剂四离心管中，如此反复2～3次，使二者充分混合溶解，配成显色剂，2℃～8℃避光保存2周内有效。
试剂五：终止液，60 mL×2瓶，4℃～8℃冰箱保存6个月。
试剂六：3mmol/L液，2 mL×1支，4℃～8℃冰箱保存6个月。
三、操作步骤：
1、前处理：
上清液制备：取全血0.1mL,加入蛋白沉淀剂0.6mL混匀，3500～4000转/分，离心10分钟，取上清液进行测定。
[注]: 1、全血及时用蛋白沉淀剂制备成乳酸上清液。
2、制成的乳酸上清冰箱4℃或者0℃以下保存，15～30天稳定不变。
3、如果您的血样很少，您可以取0.05mL全血加0.3mL蛋白沉淀剂。
2、操作表：
| 空白管 | 管 | 测定管 |
双蒸水（mL） | 0.02 |
|
|
3mmol/L液（mL） |
| 0.02 |
|
上清液（mL） |
|
| 0.02 |
酶工作液（mL） | 1 | 1 | 1 |
显色剂（mL） | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
混匀，37℃水浴准确反应10分钟 | |||
终止液（mL） | 2 | 2 | 2 |
混匀，530 nm，1cm光径，双蒸水调零，测定各管吸光度值 | |||
四、计算与举例：
1、计算公式：
N:样本前处理稀释倍数,7。
2、计算举例：
例1：取小鼠新鲜的抗凝全血0.1mL加0.6mL的蛋白沉淀剂进行样本前处理，取上清20μL进行乳酸测定，测得空白管吸光度为0.076，管吸光度为0.384，测定管吸光度为0.280。则计算结果为：
五、注意点：
1、应取空腹或静止状态下的静脉血，并避免血液淤滞，如用止血带，应在针头刺入静脉后马上放开，然后等2分钟后再抽血。
2、血液要新鲜，-好是完成，如果完不成，可将样本进行样本前处理后，将上清液4℃或-20℃保存可稳定15～30天。
3、蛋白沉淀剂如有结晶,则取上清进行实验。
4、在批量实验前需要进行预实验，以确定测定绝对OD（测定OD值-空白OD值）在0.05～0.35之间。如果测定绝对OD小于0.05，则需要加样本浓度重新测定；如果测定绝对OD于0.35，则需要将样本稀释后重新测定。
原创作者：上海信帆生物科技有限公司
