人Apelin elisa试剂盒

本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!

检测原理：

1. 采用双抗体夹心法测定 人Apelin 水平。用纯化的 人Apelin 抗体包被微孔板，制成固相载体，实验时依次在微孔板中加入样本及标准品，并加入HRP标记的抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，反复洗涤后加底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化为蓝色，再用硫酸终止反应，转变成黄色。颜色的深浅和样品中的 人Apelin 含量呈正相关。采用酶标仪在450nm波长测定吸光度（OD值），根据标准曲线，计算测试样品中 人Apelin 浓度。

人Apelin elisa试剂盒实验材料与试剂配制：

1. 仪器与材料：酶标仪（使用前预热30分钟），微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水，滤纸。

2. 洗液的配制：按1:30的比例配制洗液备用。

人Apelin elisa试剂盒 操作步骤：

1. 取出试剂盒，室温（20-25℃）放置30分钟。

2. 分组：取出96孔板，根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组（6个浓度）、空白孔、待测样品组。

标准品的稀释：准备小试管6 只，依次编好号码，先在各小试管中加入标准品稀释液100ul，然后取原浓度标准品100ul 加入一只已编好号的试管中，充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第二支试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul 加入第三只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul 加入第四只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul 加入第五只试管中，充分混匀；然后在该试管中取100ul，弃掉。第六只试管作为0 号标准品。

注：为减少实验误差，保证准确性，建议设置复孔。

3. 加样：依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中；空白对照孔加入50ul的蒸馏水；其余微孔中先加样品40ul然后再加生物素标记的抗TPH1 抗体10ul。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

4. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。

6. 加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液（空白对照孔除外）。

7. 温育：酶标板用封板纸密封后，放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。

8. 洗板：用稀释后的洗涤液注满每孔，静置15-30s，充分清洗酶标板5次，用吸水纸彻底拍干。

9. 显色：各孔加入显色剂A液50ul后，再加入显色剂B液50ul。

10. 终止：25-37℃下避光反应10-15分钟，加入50ul终止液。

11. 读板：在450nm波长读取各孔的OD值。

12. 注：读板时必须拭干板底残留的液体和手指痕迹，读板时间控制在终止反应后的30分钟内，以免影响准确性。

人Apelin elisa试剂盒安全性

1． 避免人体直接接触显色剂A、B和终止液。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

2． 实验中不要进食、抽烟或使用化妆品。

3． 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

人Apelin elisa试剂盒保存条件及有效期：

1. 试剂盒保存：2-8℃

2. 2.有效期：6个月

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