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LDH细胞毒性检测试剂盒

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更新日期：2026/8/24 23:48:28

生产地：美洲

产品型号：

简单介绍：LDH细胞毒性检测试剂盒
介绍

乳酸脱氢酶（LDH），这是存在于大多数真核细胞的可溶性胞质酶，释放到培养基中的细胞死亡后，由于质膜的破坏。在培养物上清液中的乳酸脱氢酶（LDH）活性的增加，裂解的细胞数成正比。ScienCellT LDH细胞毒性检测试剂盒提供了比色法测定LDH活性使用反应鸡尾酒含有乳酸，NAD +的diaphrose和INT。LDH催化还原NAD +，NADH在L-乳酸的存在下，而形成的NADH可以测量中的耦合反应，其中四唑鎓盐INT是减少到一个红色的甲臜产物。在490nm处用分光光度法可测的量的高度着色的可溶性甲臜。

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详细内容

工具包组件

猫。没有	＃样品瓶	试剂	数量	存储
8078a	1	LDH标准	1毫升	4 ⁰ C
8078b	1	乳酸钠，10X	1毫升	4 ⁰ C
8078c	1	INT，10X	1毫升	-20 ⁰ C
8078d	1	底物混合物	10毫升	-20 ⁰ C
8078e	1	钠Oxymate的	10毫升	4 ⁰ C

品质管制

从ScienCellT乳酸脱氢酶LDH的解决方案，从500到7.8亩/毫升的浓度毒性检测数据显示OD490nm和LDH浓度（图1）之间的线性关系。ScienCellT LDH细胞毒性检测也被施加到人类的星形胶质细胞（HAS）（阳性对照）和无（阴性对照）的Triton X-100（图2）以不同的密度接种。

程序（96 - 孔板）

细胞培养设置
1. 在96孔培养板中，在有或没有试验化合物的培养基中加入200μl的种子细胞。在CO2培养箱培养细胞在37℃，需要一段时间。我们建议您至少准备3个重复，每个测试样本。除了测试样品，阳性对照培养液中加入1％的Triton X-100和三负没有任何测试化合物或Triton X-100控制文化中应包括在内。

制备的LDH标准（可选）

添加2 LDH股票微升498微升PBS 1 U / ml的乳酸脱氢酶，使500微升的解决方案。
获得8个试管中，450微升培养基中添加到各管中，并对其进行标记＃1至＃8。
加入450微升1 U / ml的乳酸脱氢酶（LDH）解决方案为管＃1拌匀获得500亩/毫升LDH标准。
转移450μl的500亩/毫升LDH标准管＃1＃2管拌匀获得250亩/毫升LDH标准。
重复步骤4管＃3⁻⁷连续稀释LDH标准。不添加任何LDH管＃8，作为空白。

得到在96 - 孔试验板，准备3个重复（A，B，C），每个乳酸脱氢酶（LDH）标准，分装到96孔测试板的一式三份的孔中加入150μl/孔的每个乳酸脱氢酶（LDH）的标准，根据下面的盘格式：

	＃1	＃2	＃3	＃4	＃5	＃6	＃7	＃8
一	500亩/毫升	250亩/毫升	125亩/毫升	62.5亩/毫升	31.8亩/毫升	15.6亩/毫升	7.8亩/毫升	空白
乙	500亩/毫升	250亩/毫升	125亩/毫升	62.5亩/毫升	31.8亩/毫升	15.6亩/毫升	7.8亩/毫升	空白
Ç	500亩/毫升	250亩/毫升	125亩/毫升	62.5亩/毫升	31.8亩/毫升	15.6亩/毫升	7.8亩/毫升	空白

试验样品的制备和+ /-控制
1. 的96孔培养板中，在400g下离心5分钟，并从各孔中（试验，阳性和阴性对照反应孔中加入150μl的上清液转移）到相应的96 - 孔测试板的孔中。
测量
1. 为了使60微升的工作反应混合物的96 - 孔板的各孔中，添加乳酸钠，2微升2微升的INT基板组合，以36微升PBS和20μl。
2. 中加入60μl反应混合物倒入含有LDH标准，测试样品或控制96 - 孔测试板的各孔中工作。在黑暗中于室温下孵育20分钟。
3. 用20μl的草氨酸乙酯钠溶液使反应停止，96 - 孔板每孔。
4. 用ELISA板读数器在490nm处读取吸光度值。
计算
1. 平均OD490nm复制井每个LDH标准，测试样本，控制，和空白。获得的所有其他样品的平均OD490nm值减去平均OD490nm值的空白。
2. 校准OD490nm的乳酸脱氢酶（LDH）标准的基础上，使作为乳酸脱氢酶（LDH）浓度的函数作图OD490nm的标准曲线。（参见图1为一个典型的标准曲线。）趋势线的确定方程和R2值。
3. 假设趋势线的标准曲线方程，计算LDH浓度测试样品和对照如下：[LDH] =（OD _490nm处 - B）/ A
4. 计算如下的试验化合物的细胞毒性，细胞毒性（％）=（[LDH] _试样 - [LDH] _阴性对照）* 100 /（[LDH] _阳性对照 - [LDH] _阴性对照）
5. 如果是不需要的，确切的乳酸脱氢酶（LDH）浓度的乳酸脱氢酶（LDH）的标准曲线的测量可以被跳过，并且还可以计算出试验化合物的相对细胞毒性基于OD490nm值如下：细胞毒性（％）=（OD _{490nm处，测试样品} - OD _{490nm处，阴性对照组}）* 100 /（OD _{490nm处，阳性对照} - OD _{490nm处，阴性对照}）