实验辅助必备：人和肽素elisa试剂盒

实验原理

    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人和肽素水平。用纯化的人和肽素抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入和肽素，再与HRP 标记的和肽素抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的和肽素呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人和肽素浓度。

标本要求

1、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2、不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

计算

    以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项

1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2、浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3、各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4、请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6、底物请避光保存。

7、严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8、所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9、本试剂不同批号组分不得混用。

10、如与英文说明书有异，以英文说明书为准。