WB实验技术交流我们通过裂解细胞，组织等步骤已经把蛋白提取出来，但提出来后要怎么知道提出的效果怎么样，怎么才能在同等量上上样。这就需要进行蛋白定量，目前用得最多的定量方法有两种，一种是BCA法，一种是Bradford 法。下面我们详细介绍下这两种定量方法的原理与优缺点：

一、BCA法：

BCA蛋白定量法是目前广泛使用的蛋白定量方法之一。其原理是在碱性环境下 蛋白质分子中的肽链结构能与 Cu2+络合生成络合物，同时将 Cu2+还原成 Cu+。BCA 试剂可敏感特异地与 Cu+结合，形成稳定的有颜色的复合物。在 562nm 处有高的光。吸收值，颜色的深浅与蛋白质浓度成正比。使用本试剂盒检测灵敏度高，对不同种类蛋白质检测变异系数小，操作简单。

优点：

1.准确：变异系数远小于考马斯亮蓝染色法(bradford 法)

2.线性范围宽，检测灵敏，检测范围：20-2000 μg/ml

3.与金属离子、还原剂和螯合剂、去污剂兼容性好

4.质量检测标准曲线线性关系 R2 值一般为 0.998

缺点：

与 Bradford 法相比不能迅速检测，需要 37℃孵育 30 min。

二、Bradford法：

Bradford法是最简单和快速的比色蛋白定量方法。这一方法基于考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后，产生蓝色化合物，反应迅速而稳定。反应化合物在 465-595 nm 处有最大的光吸收值，化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系，因此可检测 595 nm 的光吸收值的大小计算蛋白的含量。

优点：

1. 与 BCA 法相比，使用本产品反应迅速，即加即检

2. 灵敏度范围为 100-1500 μg/ml

3. 质量检测标准曲线线性关系 R2 值一般 0.980

缺点：

1. 与金属离子、还原剂和螯合剂、去污剂兼容性差

2. 精确度没有BCA法高

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