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人抗表皮细胞基底膜抗体(EBMZ)ELISA试剂盒(酶联检测)
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价格：￥1
更新日期：2026/8/7 17:26:29
生 产 地：中国大陆
产品型号：
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详细内容
四种方法对比，以供参考，希望对您有帮助：
1、竞争法
本法首先将特异性抗体吸附于固相载体表面，我们把抗原和抗体吸附到固相载体表面的这个过程，称为包被（Coated），也可叫做致敏。经洗涤后分成两组：一组加酶标记抗原和被测抗原的混合液，而另一组只加酶标记抗原，再经孵育洗涤后加底物显色，这两组底物降解量之差，即为我们所要测定的未知抗原的量。
2.改良双抗体夹心法
本法首先是将特异性抗体a包被于固相载体，经洗涤加入含有欲测抗原之待检样品。经孵育洗涤后再加一次未标记的特异性抗体b，而这次加入的抗体b于第一次包被于固相载体上的特异性抗体a对被测抗原来说都是特异性的，但不是用同种动物免疫制备的，否则可出现非特异性反应。经孵育洗涤后，再加酶标记抗b抗体，再经孵育洗涤后加底物显色进行测定。这种方法与双抗体夹心法不同之处是多加了一层抗体。因此，放大的倍数更高，故比双抗体夹心法更加灵敏。同时避免标记特异性抗体，而另一优点是只要标记一种抗抗体，即可达到多种应用。
3.抑制性测定法
它是先用抗原包被固相载体，然后分为二组，一组加入用参考抗体和被检标本混合孵育后的混合溶液，假如标本中不含抗原，则参考抗体未被结合。因此它可以和包被于固相载体上的抗原结合。如标本中含有抗原，则抗原先与参考抗体结合，故参考抗体不再与包被于固相载体上的抗原结合。对加入酶结合物（抗球蛋白）和底物仅显示剩余结合的抗体量。再与另一组不加待检标本的参考系统比较，被检标本对底物显色的抑制程度与标本中所含抗原量成比例，二者之差，即为欲测抗原的量。
4.间接法
间接法首先用抗原包被于固相载体，这些包被的抗原必须是可溶性的，或者至少是极微小的颗粒，经洗涤，加入含有被测抗体之标本，再经孵育洗涤后，加入酶标记抗抗体，（对人的标本来说即加酶标抗人球蛋白IgG、IgM），再经孵育洗涤后，加底物显色,底物降解的量，即为欲测抗体的量，其结果可用目测或用分光光度计定量测定，本法用不同种抗原包被固相载体后，只要用一种酶标记抗人球蛋白，即可作多种人的传染病、寄生虫病以及其他疾病的血清学诊断。如用酶标记抗人IgM,则可用于早期诊断。
操作步骤人抗表皮细胞基底膜抗体（EBMZ）ELISA试剂盒（酶联检测）
| 方法 步骤 | 间接法（测抗体） | 双抗体夹心法 （测抗原） | 竞争法（测抗原） | 抑制性测定法 | |
| 1 | 包被抗原：用包被缓冲液稀释抗原至最适浓度（5～20μg/ml）各0.3ml加于微反应板每个凹孔中,4℃过夜或37℃水浴2～3小时,贮存冰箱 | 包被抗体：用包被缓冲液稀释特异性抗体球蛋白至最适浓度（1～10μg /ml），每凹孔加0.3ml，4℃过夜，或37℃水浴3小时，贮存冰箱 | 包被特异性抗体： 同左 | 包被抗原： 同左 | |
| 2 | 洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20）洗3次，每次5分钟 | 同左 | 同左 | 同左 | |
| 3 | 加被检标本：每凹孔加入用含有0.05%吐温-20的稀释缓冲液稀释的被检血清各0.2ml，37℃，作用1～2小时 | 每凹孔加入0.2ml用稀释缓冲液稀释的含抗原的被检标本，37℃作用1～2小时。 | 分2组,a组加酶标记抗原和被检抗原混合液0.2ml，另一组只加酶标记抗原液0.2ml，37℃作用1～2小时。（混合液可作成不同稀释度）。 | a组加参考抗体和被检抗原混合液0.2ml，另一组加参考抗体与等量稀释剂0.2ml，37℃作用1～2小时。 | |
| 4 | 洗涤：重复2 | 同左 | 洗涤：同左 | 洗涤 | |
| 5 | 加入酶结合物：每凹孔加入稀释缓冲液稀释的酶结合物0.2ml 37℃作用1～2小时 | 加入0.2ml用稀释缓冲液稀释的酶标记特异性抗体溶液，37℃作用1～2小时或由预试实验确定作用时间。 | | | 各加入0.2ml抗参考抗体的酶结合物37℃作用1～2小时 |
| 方法 步骤 | 间接法（测抗体） | 双抗体夹心法 （测抗原） | 竞争法（测抗原） | 抑制性测定法 | |
| 6 | 洗涤：重复2 | 同左 | | | 洗涤 |
| 7 | 加入0.2ml底物溶液于每个凹孔,（O.P.D或O.T），室温作用30分钟（另作一空白对照，0.4ml底物加0.1ml终止剂）。 | 同左 | 同左 | 同左 | |
| 8 | 加终止剂：每凹孔加2M H2SO4或2M柠檬酸0.05ml。 | 同左 | 同左 | 同左 | |
| 9 | 观察记录结果：目测或用酶标比色计测定（O.P.D用492nm）O.D值。 | 同左 | 用酶标比色计测定a、b两组O.D值，并求出a、b、O.D值的差数 | 同左 | |
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