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猪传染性胃肠炎病毒抗原(TGEV-Ag)酶联免疫分析（ELISA）

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上传时间：2013/7/15 14:59:22

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上传者：北京方程生物科技有限公司

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猪传染性胃肠炎病毒抗原（TGEV-Ag）酶联免疫分析（ELISA）实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪传染性胃肠炎病毒抗原（TGEV-Ag）水平。用纯化的猪传染性胃肠炎病毒抗原（TGEV-Ag）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被抗体的微孔中依次加入传染性胃肠炎病毒抗原（TGEV-Ag），再与HRP标记的传染性胃肠炎病毒（TGEV）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的传染性胃肠炎病毒抗原（TGEV-Ag）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中猪传染性胃肠炎病毒抗原（TGEV-Ag）浓度。
试剂盒组成：
试剂盒组成 48孔配置 96孔配置保存
说明书 1份 1份
封板膜 2片（48） 2片（96）
密封袋 1个 1个
酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
标准品：54ug/ml 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存
标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存
酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶 2-8℃保存

猪传染性胃肠炎病毒抗原（TGEV-Ag）酶联免疫分析（ELISA）样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
猪传染性胃肠炎病毒抗原（TGEV-Ag）酶联免疫分析（ELISA）4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。