以Nat. Commun.最新文章为例│详解藻类培养与表型研究产品应用：实验室进化提高聚球藻的波动光耐受性

Background

在自然界中，光照强度时刻处于动态波动状态，波动光（Fluctuating light, FL)胁迫一直是蓝藻、微藻光合生长的重要制约因素。剧烈光强起伏会破坏光合系统、引发光抑制，不仅影响藻类天然生长，更严重限制了光生物反应器工程藻株培育、光合机理研究与作物耐逆育种挖掘。尽管已有关于关键FL耐受性组分的研究报道，但其遗传机制等仍未明确：

● 已发现部分基因、蛋白参与波动光响应，但缺乏可应用的优良耐受等位基因；

● 传统培养方式无法精准模拟梯度波动光，难以开展长期适应性实验室进化（ALE）；

● 常规检测手段只能测生长量，无法快速无损评估光合系统活性、筛选表型变异菌株；

● 恒定强光与波动光耐受机制完全独立，普通培养和检测体系难以区分两类胁迫表型。

Solutions from Ecotech

在实验室尺度，如何精准模拟自然波动光环境、实现藻类长期驯化培养？如何高通量筛选光合表型差异菌株、解析光耐受生理机制？这就不得不借助一些专业的科研设备：

◆ 藻类培养与在线监测技术

● LED光源精准调控，单个或多种光质、光强无极调控，自定义光照程序

● 环境参数控制：温度、通气、pH、浊度可控

● 实时监测生长曲线（OD）

● 实时监测叶绿素荧光、pH、溶解氧等

● 不同通道数、不同规模高通量培养：同步培养1到多个通道，容积从100mL到数十升

◆叶绿素荧光测量与成像技术

● 无损测量藻类荧光参数，灵敏反映光合活性

● 多场景应用，便携式、台式、显微镜式等型号，满足各类场景需求

● 荧光成像系统高通量测量，可同时测96wells

● 多种内置测量程序，兼备调制式、非调制式测量功能参考文献众多，数据、图像可直接发文章

Typical case

接下来，我们以Nature Communications最新发表的文章（Improving tolerance to fluctuating light through adaptive laboratory evolution in the cyanobacterium Synechocystis）为案例，从实际研究出发，详解易科泰藻类培养与研究技术的应用。

先说结论：

本研究通过在两种FL条件下（其中一种对起始菌株具有致死性，记为LT）对集胞藻PCC 6803进行进化改造，依靠标准化藻类驯化培养 + 光合荧光表型精准监测全套技术，筛选出Pam68、RpaB、Sll0518 三大关键突变基因，其中Pam68（PSII 组装蛋白）和Sll0518基因突变可增强对非致死性FL的耐受性；而RpaB（藻胆体结合调节因子B）的功能获得性缺失突变则显著增强了对致死性FL及强光条件的耐受性。

● 实验室适应性进化，高效选育FL耐受菌株

ALE：指在实验室条件下通过人为选择压力促使微生物（如聚球藻属）逐步进化获得特定性状（如高光耐受性）的研究方法。本研究中设计了FL0、FL +两套方案，历时 20 个月、20 轮培养，对聚球藻进行了两种波动光方案下的ALE处理，过程依托 MC1000 8通道藻类培养与在线监测系统实现高精度控制。

● 单克隆高通量初筛分型

对驯化的培养物接种于固体培养基并在恒定LL20光照条件下培养，随后分离出单个克隆并培养，之后对单克隆菌落，利用FluorCam叶绿素荧光成像系统进行原位荧光成像，测定PSII 量子产率 Fv/Fm。依托该功能，从百余个克隆中筛选出覆盖表型多样性的通过对12株FL0和12株FL+单克隆菌株并进行全基因组分析（以这些适应性菌株的来源菌株LT以及原始可运动型集胞藻PCC 6803菌株[标记为“WT”]作为对照），获得了含412个突变的突变矩阵。大幅降低测序成本、提升筛选效率。

● 共有突变基因—Pam68功能鉴定

为验证基因功能，对Pam68过表达菌株（pam68oe），Pam68_S113G，pam68基因敲除突变体（ins0933）h在LL12和FL0final培养条件下进行比较（下左图）

为评估该S→G突变在不同物种中的适应潜力，在集胞藻LT和ins0933菌株中分别表达了野生型AtPAM68（AtPAM68WT）和AtPAM68S174G，并在LL50、HL700及FL0final条件下观察其生长情况。（下右图）

以上菌株的培养也在MC1000中完成，再次证明了这套系统在藻类全测量培养和研究阶段的重要作用。

● 特异突变基因—rpaBT183P功能鉴定

利用FluorCam叶绿素荧光成像系统，对rpaBT183P突变菌株进行非光化学荧光淬灭测量，以鉴定基因在光系统结构功能方面的作用。结果表明rpaBT183P对光系统化学计量比及外周天线结构的积累具有差异性影响：该基因通过下调藻胆体捕光容量、调控状态转换、重塑PSI/PSII化学计量比、提升CEF（环式电子传递）活性实现光保护，且存在低光生长与强光耐受的权衡。

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● 藻类表型成像分析技术

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原创作者：北京易科泰生态技术有限公司