恒远生物|生化检验中各种空白的概念_技术交流_技术文章

由于生化测试测量的吸光度为相对吸光度，所以从理论上来讲，所有终点法的测试都需要把试剂本身的吸光度扣除（试剂本身的吸光度就是试剂空白）。在传统手工法中,每次测定至少做三个管:测定管、标准管、空白管，其中空白管是试剂加蒸馏水，测出来也就是试剂空白。因为操作环境、仪器状态、试剂稳定性等变异，所以要求每次都要测定试剂空白，称为实时试剂空白。

在全自动分析仪上，大都是模拟手工操作，许多全自动分析仪为追求速度，在设计上采用折中方法来测定试剂空白。以日立全系列生化仪为例，该系列分析仪做不了实时试剂空白，因为它们全是先加样本后加试剂，为了折中，在定标时做一个试剂空白，保存起来，需要扣除试剂空白时再减这个预先保存的值。对于日立的这种试剂空白测定很多仪器都采用这种方法，也叫做试剂空白校准。

在自动生化仪上的试剂空白一般表现为零点吸光度，该吸光度是通过校准确立的。

2、样本空白：

由于溶血、脂血、黄疸等情况，会导致样本本身的吸光度对测试结果造成影响。所以对样本本身吸光度的测量，即样本空白，可以去除这方面的影响，测量方法是按照正常测试的试剂和样本量，把试剂换成蒸馏水或生理盐水来进行测量。自动生化仪上，很难界定样本空白。与消除样本空白有关的大约有如下几点:

①在双试剂测定时，加入试剂和样品后的吸光度可一定程度上扣除样本空白。（故有单试剂不能扣除样本空白的说法）。
②现在的试剂抗干扰能力都较强，比如双试剂，R1加入后先和样本孵育一段时间，将血红蛋白、脂肪、胆红素等反应掉，再加入R2开始测定反应，在一定范围内都可以消除样本空白。

③现代全自动生化仪大多采用双波长测定，双波长测定的原则是根据干扰组分和待测物质吸收光谱的峰形特征，选择两个波长和，使干扰组分在这两个波长处的吸光系数相等，使待测物质在两波长处的吸光系数有显著差别。以两波长分别测定分析溶液的吸光度，以两个吸光度值之差（△A）计算。这也可以扣除一部分样本空白。

④有些仪器,例如日立系列,有“血清信息”功能的设置，做法单独占用一个空白通道来计算，叫做样品空白校准。

3、水空白：

比色杯在加入水以后的吸光度。水空白的意义主要是对光路系统进行检查和校正，如光源，比色杯等，同时在计算中起到消除“杯差”的作用。日立7060中的Cell Blank（杯空白）测定的就是水空白。

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