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技术文章

试剂空白有哪些不良现象呢?

点击次数:3807 发布时间:2021/1/19 14:07:15

试剂空白吸光度是反映试剂质量的指标之。每种试剂都有定的空白吸光度范围,试剂空白吸光度的改变往往提示该试剂的变质;如利用Trinder反应为原理的检测试剂会因含酚类物质被氧化为醌而变为红色。碱性磷酸酶、r谷氨酰转肽酶、淀粉酶等检测试剂会因基质分解出硝基酚或酚基苯胺而变黄。有些试剂久置后变浑浊。这些情况均可使空白吸光度升高。丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶等负反应,在放置过程中其试剂空白吸光度会因NADH自行氧化为NAD+而下降。原则上,吸光度上升的反应,其试剂空白吸光度越低越好,不能超过个高限;相反,吸光度下降的反应,其试剂空白吸光度不能低于个低限。因此,试剂空白吸光度限值,常作为程序参数输入仪器,如经核查超限,仪器会自动报警,提示更换试剂。需要指出的是,还原型辅酶I(或II)等投料量不足或劣质的原料,往往需要加大用量,才使“表观”吸光度上升,凑合过试剂空白核对的“关”,其后果为如下情况:

1.线性范围变窄 现象:高值测不高。原因:生产试剂时有效成分投料量不足;试剂成份稳定性较差。
2.灵敏度变低现象:酶促反应速度曲线斜率下降,测定结果有严重系统误差。原因:试剂底物浓度不足。
3.低值偏高 现象:试剂空白的变化曲线(吸光度VS时间)明显波动。原因:试剂自身不稳定,自行分解;工具酶纯度不够,杂酶含量超限,导致干扰作用。

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