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技术文章

ELISA试剂盒质控血清的实验方法

点击次数：4563 发布时间：2013/9/29 9:51:20

1 材料与方法

标本收集 用无菌管收集临床与检验确诊为乙型病毒性肝炎患者的血清，该检测取HBsAg、HBeAg、HBcAb均为阳性并且HBsAg的S/CO值在100以上者，外观需无溶血、脂血、黄疸、无污染、清晰透明。收集20份左右，约10 ml，充分混匀，分装后置4 ℃和-20 ℃冰箱保存备用。

实验方法

确定稀释度 用灭活双蒸水稀释混合血清成不同稀释倍数，严格按照试剂盒操作说明，常规条件下与卫生部临检中心提供临界值血清同测，测得1/400倍时，其OD、S/CO值与卫生部临检中心提供的临界值血清接近。

分装备用 将混合血清作1/400倍的大批量稀释，其中小牛血清占15%，二甲亚砜占05%，叠氮钠占03%,混匀灭菌分装，冷藏和冰冻保存。

标本处理 取4 ℃和-20 ℃冰箱保存的质控血清，置56 ℃ 10 h灭活后离心沉淀，过滤除菌。

统计学方法 所有指标用OD均值x，SD的均值S，以x±S表示，采用SPSS 100软件统计，比较采用配对t检验。

2 结果

　　（1）取1/400倍稀释血清连续20次重复测定，可得OD的均值，SD的均值，S/CO的值，两种试剂、两种批号的结果差异不大。（2）将4 ℃冷藏1周和-20 ℃冷冻1个月的稀释血清随机抽取质控血清，连续检测20次，可得OD的均值，SD的均值。CV为53%左右，S/CO的均值为116。 不同厂家连续检测室温质控血清HBsAg的结果表2 质控血清在不同温度保存后测得的结果比较

3 讨论

　　（1）在实验室常规操作进行中，测得S/CO均值为115，保证实验的可靠性，且该实验质控血清显示结果时颜色较浅，但肉眼仍可与阴性对照明显区别。

（2）按我国临床实验室条件和试剂生产水平，卫生部HBsAg（ELISA）临界值血清标准为2 ng/ml［1］。其OD值约为0056左右，S/CO均值为115，SD为0002593，CV为46%,4 ℃和-20 ℃保存后连续检测结果OD值在0059左右，SD值约为0002900，CV约为53%，S/CO的均值为116。说明该自制质控血清较稳定。

（3）该质控血清是临界与阴性的弱阳性血清，这种低值血清能检测出，为低值阴性标本的检出提供参照，其他低值的阳性标本就不易漏检

（4）选试剂盒时，试剂盒是否符合要求，通过自制质控血清及卫生部临检中心提供临界血清随同当日标本检测，可客观地比较各厂家试剂盒及其不同批号的灵敏度，对试剂质量起监督作用

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