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技术文章

上海恒远讲述细胞的培养和转染

点击次数：4194 发布时间：2013/3/29 11:32:29

1. 细胞培养（HEK293T）
1）显微镜下观察细胞，细胞生长状态良好，去上清；
2）加入预热的PBS 3ml, 温柔地清洗细胞,弃去PBS；
3）用胰蛋白酶消化细胞，通常75cm2 培养瓶的贴壁细胞用3ml 胰蛋白酶于37oC
处理5min；
4）待细胞脱落后，加入5ml DMEM 培养液（含10%FBS）以终止消化反应，并将
细胞悬液转移入15ml 或50ml 离心管中；
5） 1000rpm 离心5min，去除上清；
6）加入10ml DMEM 培养液（含10%FBS），重新悬浮细胞，使细胞充分打散；
7）进行细胞计数,（4 个大方格细胞数的均值×104 个为每ml 所含细胞数）；
8）根据细胞计数结果，将适当数量的细胞悬液转接入含有新鲜培养液的培养瓶
或皿中；（第二天做转染，A.Fugene6 法－－细胞总量应达4-5×106 /10cm 培养
皿; B. 磷酸钙法: 细胞总量应达3×106 / 10cm 培养皿）；
9）置于37 ℃ 5％CO2 的培养箱中培养（注意培养箱应有足够的水分）。
注：以上所使用的胰蛋白酶、培养液等在使用前都置于37℃水浴中预热，以减
小对细胞的刺激。
2. 细胞转染
2.1 脂质体介导的贴壁细胞转染法
以下针对293T 细胞、10cm 培养皿
目前主要使用试剂盒为Roche 公司的FuGENETM6 Transfection Reagent
1）转染前24 小时以4-5×106 /10cm 培养皿的细胞总量铺板，当细胞生长状态

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