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什么是ELISA包被方式
点击次数：2263发布时间：2019/8/21 8:57:12
将抗原或抗体固定在进程称为包被（coating）。换言之，包被便是抗原或抗体结合到固相载体外表的进程。蛋白质与聚苯乙烯固相载体是经过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体外表的疏水基团间的效果于。
这种物理吸附对错特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响。载体对不同蛋白质的吸附才能是不相同的，大分子蛋白质较小分子蛋白质一般含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体外表。IgG对聚苯乙烯等固相具有较强的吸附力，其联合多发生在Fc段上，抗体结合点露出于外，因而抗体的包被一般均选用直接吸附法。
蛋白质抗原大多也可选用与抗体类似的办法包被。当抗原决定簇存在于或邻近于疏水区域时，抗原与固相载体的直接吸附可使抗原决定簇不能充沛露出，在这种情况下，直接包被效果欠安，能够选用直接的捕获包被法，即先将针对该抗原的特异抗体作预包被，其后经过抗原抗体反响使抗原固相化。此直接结合在固相上的抗原远离载体外表，其抗原决定簇也得以充沛露出。
直接包被的抗原经固相抗体的亲和层析效果，包被在固相上的抗原纯度大大进步，因而含杂质较多的抗原也可选用捕获包被法,试验的特异性、敏感性均由此得以改进，重复性亦佳。直接包被的另一优点是抗原用量少，仅为直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯载体上的非蛋白质抗原可选用特别的包被办法。例如，在检测抗DNA抗体时，需用DNA作为包被抗原，而普遍的固相载体一般不能直接与核酸结合。可将聚苯乙烯板先经紫外线照耀（例如30W紫外灯，75cm照耀12小时），以添加其吸附性能。
固相载体先用碱性蛋白质，如聚赖氨酸、鱼精蛋白等作预包被，也可进步核酸的结合力。也可用亲和素生物素体系作直接包被，即用亲和素先包被载体，然后参加生物素化的DNA，这种包被办法均匀、牢固，已扩展应用于各种抗原物质的定量测定。
脂类物质无法与固相载体结合，可将其在有机溶剂（例如乙醇）中溶解后参加ELISA板孔中，开盖置冰箱过夜或凉风吹干，待酒精蒸发后，让脂质自然干固在固相外表。抗心磷脂抗体的ELISA试剂一般选用这种包被办法。
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