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ELISA研究视角来看实验重点内容
点击次数：1176发布时间：2014/9/23 8:42:02
在操作实验的时候，不少新手会忽略了实验的主要原理这一问题。ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点，今天上海恒远带您从ELISA研究视角来看实验重点内容，ELISA实验新手可要注意喽！
对于一些小分子的检测，比如前列腺素、糖皮质激素的检测，可以选择用竞争法ELISA去检测，也要购买采用这个方法的盒子。一般细胞因子的检测，都是采用常规的夹心法ELISA检测，因为因子分子量比较大，一般10几个KD左右，很容易找到两个或者多个抗原表位。而小分子很难找到两个不同的表位，也就决定了包被抗体和检测抗体无法同时结合小分子并固相化。解决方案就是酶标板上包被二抗，每个孔加入一定量的酶标的小分子，然后加样品，再加不带标记的检测抗体，显色底物。样品的目的小分子的含量越高，吸光度越低。
·ELISA研究之浸泡式洗涤：
1. 吸干或甩干孔内反应液；
2. 用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后，即甩去)；
3. 浸泡，即将洗涤液注满板孔，放置1-2分钟，间歇摇动，浸泡时间不可随意缩短；
4. 吸干孔内液体。吸干应彻底，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液体后在清洁毛巾或吸水纸上拍干；
5. 重复操作c和d，洗涤3-4次(或按说明规定)。在间接法中如本底较高，可增加洗涤次数或延长浸泡时间。
微量滴定板多采用浸泡式洗涤法。洗涤液多为含非离子型洗涤剂的中性缓冲液。聚苯乙烯载体与蛋白质的结合是疏水性的，非离子型洗涤剂既含疏水基团，也含亲水基团，其疏水基团与蛋白质的疏水基团借疏水键结合，从而削弱蛋白质与固相载体的结合，并借助于亲水基团和水分子的结合作用，使蛋白质回复到水溶液状态，从而脱离固相载体。洗涤液中的非离子型洗涤剂一般是吐温 20，其浓度可在0.05%-0.2%之间，高于0.2%时，可使包被在固相上的抗原或抗体解吸附而减低试验的灵敏度。
ELISA研究也是要靠经验总结的，做的多了自然就熟练了。了解更多的相关资料内容您可以在本网站中留言，也可以给我司业务员来电。
