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ELISA实验之洗涤要点

点击次数：4040 发布时间：2021/8/17 9:51:22

上海恒远生物技术员为大家总结ELISA实验要点，希望能对大家的实验有所帮助。

洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在ELISA操作中，洗涤是主要的关键技术，应引起操作者的高度重视，不得马虎。

洗涤的方式除某些ELISA仪器配有特殊的自动洗涤仪外，手工操作有浸泡式和流水冲洗式两种，过程如下：

1.浸泡式

①吸干或甩干孔内反应液；

②用洗涤液过洗一遍；

③浸泡，即将洗涤液注满板孔，放置1～2分钟，间歇摇动，浸泡时间不可随意缩短；

④吸干孔内液体，吸干，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液体后在清洁毛巾上拍干；

⑤重复操作③和④，洗涤3～4次。在间接法中如本底较高，可增加洗涤次数或延长浸泡时间。

2.流水冲洗式

流水冲洗法初用于小珠载体的洗涤，洗涤液仅为蒸馏水甚至可用自来水。洗涤时附接一特殊装置，使小珠在流水冲击下不断地滚动淋洗，持续冲洗2分钟后，吸干液体，再用蒸馏水浸泡2分钟，吸干即可。浸泡式犹如盆浴，流水冲洗式则好比淋浴，其洗涤效果更好，且也简便、快速。已有实验表明，流水冲洗式同样也适用于微量滴定板的洗涤。洗涤时设法加大水流量或加大水压，让水流冲击板孔表面，洗涤效果更佳。

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