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大鼠8异前列腺素(8-iso-PG)ELISA检测试剂盒
价格：￥1000
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/9 10:31:09
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科研Elisa
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详细内容
大鼠8异前列腺素（8-iso-PG）ELISA检测试剂盒试验原理：
大鼠8异前列腺素（8-iso-PG）ELISA检测试剂盒是固相夹心法免疫吸附实验（ELISA）.已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制
自备材料
1）蒸馏水。
2）加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3）振荡器及磁力搅拌器等。
安全性
1）避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2）实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3）不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项
1）试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2）实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3）不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4）使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5）使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6）洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7）底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8）加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9）按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法
1）血清－－－－-操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2）血浆－－－－-EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3）细胞上清液－－-1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4）组织匀浆－－－－-将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液
5）保存－－－－－－如果样品不立即使用，应将其分成小部分⁻⁷0℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备
1）标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。
2）洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。
操作步骤
1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9）在450nm波长处测定各孔的OD值。
局限
6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。
试剂盒性能
1. 灵敏度：小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性：不与其它细胞因子反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。
结果判断与分析
1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的待测物质标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的待测物质含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
| ELISA试剂盒实验中的常见问题 | |
| 无信号 | |
| 可能原因 | 解决方法 |
| 试剂添加顺序错误或试剂配制有误 | 重复实验 |
| 检查试剂配制方法 | |
| 复核试验试剂添加流程 | |
| HRP被叠氮化合物污染 | 用新鲜配制的试剂 |
| 体用量不足 | 使用推荐的抗体量 |
| 边缘效应 | |
| 可能原因 | 解决方法 |
| 孵育温度不均衡 | 孵育时使用封板胶纸 |
| 勿在环境温度变化大的地方孵育 | |
| 显示缓慢 | |
| 可能原因 | 解决方法 |
| 酶标板未处于正确温度下 | 确保使用前酶标板和试剂处于室温下 |
| 溶液污染 | 避免使用含NaN3的试剂 |
| 高背景信号 | |
| 可能原因 | 解决方法 |
| 洗板不充分 | 洗涤缓冲液加入孔中洗涤，确保洗涤充分 |
| 确保在洗涤前弃掉了所有残留抗体溶液 | |
| 样品或标准品中含干扰物 | 设置空白对照 |
| 冲液受污染 | 重新配制缓冲液 |
| 板间重复性差 | |
| 可能原因 | 解决方法 |
| 洗板不充分 | 将洗涤缓冲液加入孔中洗涤，确保洗涤充分 |
| 确保已在洗涤前弃掉所有残留溶液 | |
| 孵育温度发生变化 | 严格按照推荐的温度孵育 |
| 勿在环境温度变化大的地方孵育 | |
| 操作流程改变 | 严格按照相同的操作流程 |
| 封板胶纸重复使用导致HRP残留污染 | 每一步均使用新的封板胶纸 |
| 整版读数偏低 | |
| 可能原因 | 解决方法 |
| 酶标仪波长设置不正确 | 检查酶标仪参数设置 |
| 包被的酶标板超过使用效期 | 更换新批次试剂盒 |
热门标签：大鼠8异前列腺素(8-iso-PG)ELISA检测试剂盒
