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兔血管内皮生长因子A(VEGFA)ELISA试剂盒
价格：￥1000
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/9 10:30:41
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科研Elisa
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详细内容
本试剂盒仅供研究使用。
使用目的：
本试剂盒用于测定血清、血浆及相关液体样本中待测物质的含量。
兔血管内皮生长因子A（VEGFA）ELISA试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中待测物质水平。用纯化的待测物质抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入待测物质，再与HRP标记的待测物质抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测物质呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中待测物质浓度。
试剂盒组成
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
兔血管内皮生长因子A（VEGFA）ELISA试剂盒操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10．如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
兔血管内皮生长因子A（VEGFA）ELISA试剂盒保存条件及有效期
1．试剂盒保存：2-8℃。
2．有效期：6 个月
| ELISA试剂盒实验中的常见问题 | |
| 无信号 | |
| 可能原因 | 解决方法 |
| 试剂添加顺序错误或试剂配制有误 | 重复实验 |
| 检查试剂配制方法 | |
| 复核试验试剂添加流程 | |
| HRP被叠氮化合物污染 | 用新鲜配制的试剂 |
| 体用量不足 | 使用推荐的抗体量 |
| 边缘效应 | |
| 可能原因 | 解决方法 |
| 孵育温度不均衡 | 孵育时使用封板胶纸 |
| 勿在环境温度变化大的地方孵育 | |
| 显示缓慢 | |
| 可能原因 | 解决方法 |
| 酶标板未处于正确温度下 | 确保使用前酶标板和试剂处于室温下 |
| 溶液污染 | 避免使用含NaN3的试剂 |
| 高背景信号 | |
| 可能原因 | 解决方法 |
| 洗板不充分 | 洗涤缓冲液加入孔中洗涤，确保洗涤充分 |
| 确保在洗涤前弃掉了所有残留抗体溶液 | |
| 样品或标准品中含干扰物 | 设置空白对照 |
| 冲液受污染 | 重新配制缓冲液 |
| 板间重复性差 | |
| 可能原因 | 解决方法 |
| 洗板不充分 | 将洗涤缓冲液加入孔中洗涤，确保洗涤充分 |
| 确保已在洗涤前弃掉所有残留溶液 | |
| 孵育温度发生变化 | 严格按照推荐的温度孵育 |
| 勿在环境温度变化大的地方孵育 | |
| 操作流程改变 | 严格按照相同的操作流程 |
| 封板胶纸重复使用导致HRP残留污染 | 每一步均使用新的封板胶纸 |
| 整版读数偏低 | |
| 可能原因 | 解决方法 |
| 酶标仪波长设置不正确 | 检查酶标仪参数设置 |
| 包被的酶标板超过使用效期 | 更换新批次试剂盒 |
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