企业档案
会员类型：旗舰版
已获得阿仪网信誉 等级评定
(0 -40)基础信誉积累，可浏览访问
(41-90)良好信誉积累，可接洽商谈
(91+ )优质信誉积累，可持续信赖
阿仪网旗舰版会员：3年
工商认证 【已认证】
最后认证时间：
注册号： 【已认证】
法人代表： 【已认证】
参观次数：603045
技术文章
养细胞的都该知道：全球三成细胞系支原体阳性，而你可能从来没测过 | 富衡生物
点击次数：165 发布时间：2026/9/22 15:00:13
先问个问题：你实验室的细胞，上一次测支原体是什么时候？
想不起来？那你不是一个人。
DSMZ（德国微生物和细胞培养物收藏库）等机构的常年调查显示，全球送检细胞系的支原体阳性率在20%–30%。也就是说，同行手里差不多每三四株细胞，就有一株是“带病上岗”。
支原体最阴险的地方在于：它不搞死你的细胞，只是悄悄改你的数据——增殖变慢、代谢异常、转染效率下降、WB 莫名多出杂带。等你察觉不对，细胞往往已经传了五六代，这期间做的实验，结论全要打个问号。
更扎心的是投稿。早在 2013 年，Nature 系列期刊就明确要求：涉及细胞培养的投稿，必须报告支原体检测情况；如今 JCCS 等一大批高水平期刊都把“写明支原体筛查方法和结果”写进了投稿须知。文章投出去，审稿人一句“please provide mycoplasma testing records”，你拿什么回？
很多实验室的选择是送培养法——然后等28 天。细胞代次不等人，实验节奏不等人，审稿人更不等人。
其实还有个选择：qPCR，两三个小时出结果，灵敏度还比培养法高一个数量级。但不少人心里嘀咕：这么快，准吗？期刊认吗？今天一次说清楚。
先交代一句支原体为什么这么难防：它直径只有 0.1–0.8 μm，没有细胞壁，常规除菌滤膜拦不住；污染后培养基不浑、光学显微镜看不见；对常规抗生素天然耐药——防它，只能靠检测。
聊 qPCR 之前，得先知道教科书里的两位“准”。
位：培养法。
把样本接种到支原体专用培养基上，培养 28 天，看有没有长出典型的“荷包蛋”样菌落。这是法规效力最高的经典方法，优点是稳，缺点是慢——慢到按“月”算。它还有两个先天盲区：一是有些支原体长得特别慢、甚至在人工培养基上根本不长，比如最常见的污染种之一猪鼻支原体（M. hyorhinis），压根不在固体培养基上形成可见菌落，培养法对它只能干瞪眼；二是检测需要阳性活菌对照，普通科研实验室根本没条件养，基本只能外送。
第二位：指示细胞培养法，也叫 DNA 荧光染色法。
样本接种到指示细胞上共培养，再用 Hoechst/DAPI 这类 DNA 荧光染料染色，荧光显微镜下看细胞周围的特征性荧光颗粒。它跟培养法互补，但也要 14–28 天，需要荧光显微镜，而且低浓度污染时灵敏度不足，判读非常依赖经验——那点点荧光是支原体还是细胞碎片，新手和老手看的是两个世界。
一句话总结：两位老前辈确实稳，但都是“月”字辈的。在细胞代次以天计、投稿周期以周计的科研节奏里，这个“月”字有点要命。
先说科研人最关心的：期刊认不认？
认，而且认了很多年了。
再看一眼药典——这是 qPCR 的“满级背书”。
你可能会想：我一个做科研的，药典跟我有什么关系？关系在于：药典是检测方法最严格的考官，连药品放行这种“输不起”的场景都开始认 qPCR，你拿它做日常科研质控，底气是满的。
至于“方法学验证”那一整套（中国药典通则 9201 的检出限、专属性、重现性、耐用性四项），是药企做 IND 申报、产品放行时才需要跨的门槛；科研实验室日常监测，用合规的商品化试剂盒、按说明书把对照做齐，就完全站得住。
qPCR 自测，两三个小时出结果，一次成本几十块钱，一台普通 qPCR 仪就能跑。但有几件事得做到位，否则白测。
什么时候测？记住三个“必测”加一个“随时”：
什么时候该测支原体：三个“必测”+一个“随时”（AI 示意图）
选试剂盒，记住“三问”：
商品化 qPCR 支原体检测试剂盒开箱：2×qPCR 反应预混液、引物预混液、阳性对照、超纯水配齐，对照做齐、两小时出结果（图为富衡生物 FH8004 qPCR 支原体检测试剂盒）
取样也有讲究：
用传代培养 48 小时后的细胞上清（让支原体在培养体系里富集），有条件的话细胞和上清一起取——支原体可能黏在细胞表面甚至钻进细胞内，只取上清理论上可能漏。现在不少试剂盒支持上清直接上机、不用提 DNA，按说明书来就行。
回到开头的问题：qPCR 准不准、认不认？答案已经很清楚——期刊推荐了十几年，药典 2026 年正式“扶正”，中检院亲自背书。
但这不是说培养法该退休了。成熟的做法是分层使用：
日常监测，qPCR 扛大旗
——快、便宜、自己实验室就能做，两小时出结果，不耽误细胞传代；
关键节点兜底
——重要细胞株建库、污染处置后的确认、投稿前要出正式报告，加做一次培养法或送有资质的机构复核，给数据上双保险。
老前辈们没退休，只是不用事事都亲自上了。
做个小调查：你们实验室多久测一次支原体？是每月例行、想起来才测，还是……从来没测过？评论区聊聊，中过招的同行欢迎来分享你的“28天血泪史”。
参考来源：
Young L, Sung J, Stacey G, Masters JR. Detection of Mycoplasma in cell cultures. Nature Protocols, 2010, 5:929–934. DOI: 10.1038/nprot.2010.43
《中华人民共和国药典》2025年版 通则3301 支原体检查、通则9201 药品微生物检验替代方法验证指导原则
欧洲药典 EP 2.6.7 Mycoplasmas（12.2版，2026年4月1日生效）修订解读，申科生物：https://www.shenkebio.com/newsInｆormation/3136.cshtml
中检院团队NAT方法学验证论文，Molecules (2026)，DOI: 10.3390/molecules31111794，PMID: 42280102：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42280102/
普通PCR与实时荧光定量PCR检测细胞支原体污染的效能系统评价，《中国疫苗和免疫》2025：https://zgjm.cbpt.cnki.net/portal/journal/portal/client/paper/0c26c00b5ec3fbc322b5714fdd5eebf2
Thermo Fisher《支原体检测监管拐点：从培养法到NAT》白皮书：https://documents.thermofisher.com/TFS-Assets/BPD/Reference-Materials/mycoplasma-testing-regulatory-inflection-point-culture-nat-white-paper.pdf
富衡生物 · 细胞培养整体解决方案
上海客户可上门提供技术服务
原创作者：上海富衡生物科技有限公司
