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技术文章
培养皿惊魂记：教你一眼看穿那些"黑影"是细胞还是污染！| 富衡生物
点击次数：961 发布时间：2026/5/28 13:19:45
各位实验台的"守夜人"、生物圈的"铲屎官"们，大家好！ 相信每个做细胞培养的小伙伴，都有过这样的经历： 某天，你像往常一样走进培养间，透过显微镜的目镜观察你的"宝贝"细胞。突然，你的心脏漏跳了一拍——视野边缘，或者培养瓶的一角，出现了一团黑色的、不明性质的团块或斑点。 那一刻，你的冷汗瞬间就下来了："完了，是污染了吗？这半个月的心血白费了？" 别慌！今天我就来给大家传授一本《细胞房避坑指南之黑影分辨秘籍》。学会这几招，让你在面对"黑团块"时，不再瑟瑟发抖。
01
招：看形态 —— "铁板一块" vs "一盘散沙"
这是最直观的判断方法。我们需要把显微镜调到10倍物镜（也就是低倍镜），仔细观察这个团块的边缘和结构。
疑似微生物污染（真菌/霉菌）
如果你的培养液里漂浮着类似"棉花絮"、"蜘蛛网"或者"小芝麻粒"的东西，那基本就是真菌污染没跑了。
• 菌丝（Hyphae）： 看起来像细长的丝线，互相交织在一起，像一团乱麻。
• 孢子（Spores）： 很多真菌会脱落孢子，你在镜下会看到很多细小的、亮亮的、在微微布朗运动的黑点。
• 特征：边缘模糊，结构松散。 它们往往不是静止的，随着时间推移（几小时），你会惊恐地发现它们变多了、变大了！
疑似细胞团（Cell Clumps）
细胞在消化传代时，如果没有吹打均匀，或者某些细胞本身就爱抱团（比如RAW264.7、THP-1或干细胞），就会形成细胞团。
• 特征：边缘相对圆润、清晰。 细胞团通常是一个致密的实体，你能隐约看到里面是由一个个圆形的细胞组成的（像一串葡萄）。
• 静止不动： 除非你晃动培养皿，否则细胞团通常是固定在瓶底某个位置的，不会像污染物那样"飘忽不定"。
02
第二招：看动态 —— "原地踏步" vs "四处流浪"
如果形态上看不出来，那就把时间轴拉长，看它们的运动轨迹。
微生物的动态
细菌和酵母通常太小，肉眼难辨，但真菌（霉菌）的生长速度是惊人的。
•倍增时间： 可能只需要2-4小时。
• 现象： 早上看着只是一小点，下午再看可能就长成了一朵"小蘑菇云"。
• 漂浮感： 它们通常不贴壁，随着培养液的流动而飘荡。
细胞团的动态
细胞生长是需要时间的，尤其是形成大团块后，内部的营养交换受限，生长会变慢。
• 现象： 今天看是这样，明天看还是这样，甚至会因为凋亡而变小、解体。
• 贴壁性： 大部分贴壁细胞的细胞团是牢牢贴在瓶子上的，晃动液体，它们纹丝不动；而污染物流动不居。
03
第三招：看"气质" —— 清澈见底 vs 浑浊不堪
除了看那个黑点本身，还要看培养基的环境。
04
第四招：绝杀 —— 换液大法
操作步骤：
1. 吸走旧的培养基。
2. 用PBS（磷酸盐缓冲液）轻轻冲洗细胞层两遍。
3. 加入新的培养基。
结果判断：
• 如果是污染：你会发现，无论你怎么洗，那些黑色的斑点依然阴魂不散，甚至洗着洗着，整个视野都脏了。因为它们已经附着在瓶底或者就在细胞之间了。
• 如果是细胞团：单纯冲洗很难冲掉（因为是细胞的一部分），但如果你用移液枪吹打它，细胞团会被打散成单个细胞（或者更小的团）。
05
实战演练：看图说话
场景 A：
小白在镜下看到一个黑色的、毛茸茸的球，边缘像树枝一样分叉，而且培养基有点浑浊。
👉 诊断：真菌污染！ 赶紧扔！不要犹豫！封好瓶口，高压灭菌后再丢弃！
场景 B：
小黑在镜下看到一个黑色的圆球，边缘光滑，仔细看能看到球体内有细胞核，培养基很清亮，pH值正常。
👉 诊断：细胞团块。 不用担心，下次消化的时候多吹打几次，或者尝试用细胞筛过滤一下就好。
06
给新手的特别叮嘱
1. 预防为主：
一旦怀疑是真菌污染，时间隔离！ 把它移出培养箱，放在单独的隔离区，防止孢子飘到别的细胞里。
2. 不要心存侥幸：
如果是珍贵的原代细胞，哪怕只有一点点污染迹象，也建议备份冻存。因为真菌一旦爆发，整瓶细胞都会死掉，甚至殃及池鱼。
3. 定期消毒：
养成好习惯，每周用酒精擦拭培养箱内壁，定期更换水盘里的水（加硫酸铜或抑菌剂）。
07
写在
做细胞培养，心态很重要。遇到黑团块，深呼吸，拿出今天的"秘籍"对照一下。记住，清晰的视野和冷静的判断，才是拯救实验数据的关键。
祝大家的细胞都长得像"皮卡丘"一样又快又好，永远没有污染！
大家还遇到过什么奇奇怪怪的污染？欢迎在评论区晒图吐槽！👇
原创作者：上海富衡生物科技有限公司
