企业档案
会员类型：旗舰版
已获得阿仪网信誉 等级评定
(0 -40)基础信誉积累，可浏览访问
(41-90)良好信誉积累，可接洽商谈
(91+ )优质信誉积累，可持续信赖
阿仪网旗舰版会员：3年
工商认证 【已认证】
最后认证时间：
注册号： 【已认证】
法人代表： 【已认证】
参观次数：742505
技术文章
Expi293F：蛋白表达界的"快枪手"，一篇搞懂怎么用| 富衡生物
点击次数：910 发布时间：2026/5/12 14:12:04
做蛋白表达的同行，应该都经历过这种绝望时刻—— 周一早上兴冲冲种下细胞，周三一看：好家伙，室友的293T都快长满瓶了，你的细胞还在"岁月静好"；老板周五要结果，你看着那慢悠悠的生长曲线陷入沉思；好不容易转染了吧，表达量低到怀疑人生，Western blot跑出来跟没加样似的…… 如果你也曾被这些问题折磨过，那今天要介绍的这位"快枪手"，你一定得认识一下——Expi293F细胞。 一句话定位：Thermo Fisher专为高产蛋白表达优化的悬浮培养HEK293亚系，转染效率高、表达量可达1-2g/L，是蛋白表达界的"扛把子"。
很多新手小白可能一开始就被Expi293F这个绕口的名字整懵了——这到底是啥？跟293T、293F有啥区别？别急，让我们先理清这个大家族的关系。
HEK293家族族谱
HEK293（老祖宗，1973年建立）
│
├── 293T（加了SV40大T抗原，转染效率高，贴壁）
│
└── 293F（适应悬浮培养的克隆）
│
├──FreeStyle 293-F（换了个"培养基户口"）
│
└── Expi293F（Thermo Fisher优中选优的高产克隆）👈今天的主角
│
├── Expi293F GnTI-（糖基化简化版）
└── Expi293F Inducible（四环素诱导版）
简单来说，Expi293F就是293F的"升级Pro Max版"，在293F的基础上进一步优化，获得了这个转染效率更高、蛋白产量更猛的细胞系。
为什么Expi293F这么能打？
官方原话说得很清楚：
"Expi293F™ Cells are human cells derived from the 293F cell line... They are highly transfectable and generate superior protein yields compared to standard 293 cell lines in transient protein expression."
翻译成人话就是：这孩子天生底子好， 转染效率高，蛋白产量更是吊打普通293。
有打？官方数据说表达量可以做到1-2g/L。对，你没看错，是克级别的，不是毫克。这在悬浮293系统里算是天花板级别的存在了。
作为一篇正经的工具文，先把关键参数给大家摆清楚👇
几个关键点提醒：
CO₂浓度是7~8%，不是5%！ 很多新手习惯性设5%，结果细胞状态差到离谱——这锅CO₂浓度背定了。
摇床转速别死记，要根据摇床轨道直径和瓶子大小调整。
无血清培养，意味着没有胰酶、没有FBS、不用担心批间差异，但培养基必须是专用的Expi293培养基，普通培养基喂不活这祖宗。
纸上谈兵不如实战演练。下面是Expi293F的标准操作流程，根据细胞饲养员们的实操经验整理，建议收藏备用。
复苏步骤（Day 0）
准备：37°C水浴锅、预热的Expi293培养基、125 mL摇瓶（透气盖）
操作：
1. 取出冻存管，37°C水浴1-2分钟，快速解冻（不要等到完全融化，看到还有一小块冰就行）
2. 超净台里把细胞转移到15 mL离心管
3. 缓慢加入5 mL预热培养基，1000 rpm离心5分钟
4. 弃上清（冻存液对细胞有毒性，必须去掉）
5. 用2-3 mL培养基轻轻吹匀
6. 转移到含20 mL预热培养基的125 mL摇瓶中
7. 37°C、7% CO₂、90 rpm摇床培养过夜
第二天：观察细胞状态，进行细胞计数。活力应该≥90%才算合格。
传代步骤（Day 3-4）
当细胞密度达到2-3×10⁶ cells/mL时，就可以传代了。
操作：
1. 轻轻吹打细胞（Expi293F是悬浮细胞，不用胰酶，直接吹打就能分散）
2. 取样计数
3. 按0.4-0.5×10⁶ cells/mL接种到新培养基
4. 继续培养
小技巧：
• 传代比例可以根据生长速度灵活调整，长得快可以1:4-1:5，慢的话1:2-1:3，当然最佳方式是进行细胞计数结果设计传代比例。
• 吹打时力度适中，太温柔吹不散，太暴力会把细胞吹死
冻存步骤
如果你想备份一批细胞，可以冻存起来：
1. 收集对数期细胞（密度2-3×10⁶ cells/mL）
2. 1000 rpm离心5分钟
3. 弃上清，用无血清细胞冻存液重悬
4. 分装到冻存管（一般1 mL/管，浓度1×10⁷ cells/mL）
5. -80°C过夜，第二天转入液氮保存
注意：液氮保存要用气相液氮罐，别直接泡在液氮里，冻存管爆炸的新闻了解一下。
常见坑点大盘点
✅ 适合场景
• 重组蛋白表达：尤其是需要高产量的时候，1-2g/L的表达量不是盖的
• 抗体生产：瞬时表达抗体、scFv等，Expi293F都能hold住
• 病毒包装：慢病毒、腺相关病毒（AAV）等，悬浮培养更方便放大
• 膜蛋白表达：有专门的Expi293 MembranePro系统支持
• 结构生物学研究：需要大量蛋白做结晶或冷冻电镜的同学
❌ 不适合场景
• 需要贴壁的实验：比如某些需要细胞极性的研究，悬浮细胞不适用
• 常规细胞培养教学：293T更常见、更容易上手，新手教学用293T更合适
• 不需要高表达量的基础实验：普通293或HEK293T可能就够用了
如何选择293家族成员？
Expi293F专为高产量蛋白表达而生。悬浮培养、无血清、配套完整——从复苏到传代到转染，一条龙服务给你安排明白。
一句话总结：如果你的实验需要大量蛋白表达，Expi293F是目前的"版本答案"之一。
参考文献
Krasnoselska GO, et al. Transient Transfection and Expression of Eukaryotic Membrane Proteins in Expi293F Cells and Their Screening on a Small Scale. Methods Mol Biol. 2021;2305:105-128.
Zhao X, et al. Transient expression of Fc-fused human glycoprotein 130 in Expi293F suspension cells. Protein Expr Purif. 2016;124:41-47.
原创作者：上海富衡生物科技有限公司
