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技术文章
上海富衡 | Giemsa 染色法检测细胞凋亡操作步骤
点击次数：2352 发布时间：2025/5/23 10:14:56
Giemsa 染色法能够通过观察细胞形态变化来检测细胞凋亡，以下为详细操作步骤：
一、细胞准备
培养细胞：将待检测的细胞接种于细胞培养瓶或培养皿中，使用适宜的培养基在合适条件（如 37℃、5% CO₂）下培养，使细胞生长至对数生长期。这一时期的细胞代谢活跃，对各种刺激反应敏感，便于后续诱导凋亡及观察。
诱导凋亡：根据实验需求，采用合适方法诱导细胞凋亡。例如，对于一些肿瘤细胞系，可使用特定浓度的化疗药物（如顺铂）处理细胞；对于正常细胞，可采用紫外线照射、氧化应激试剂（如过氧化氢）等手段。诱导时间依据细胞类型和诱导方法而异，一般在数小时至数十小时不等。处理完成后，收集细胞用于染色。
二、细胞固定
收集细胞：将诱导凋亡后的细胞培养物转移至离心管中，以 1000 - 1500 rpm 的转速离心 5 - 10 分钟，使细胞沉淀于离心管底部。轻柔吸去上清液，注意避免吸走细胞沉淀。
固定细胞：向含有细胞沉淀的离心管中加入适量的固定液（常用 4% 多聚甲醛溶液），轻轻吹打使细胞重新悬浮，确保细胞均匀分布在固定液中。室温下固定 15 - 30 分钟，固定过程中细胞的蛋白质等生物大分子发生交联，从而保持细胞形态和结构，便于后续染色观察。固定完成后，再次以 1000 - 1500 rpm 离心 5 - 10 分钟，弃去固定液。
三、Giemsa 染色
配制 Giemsa 染液：按照 Giemsa 染液与磷酸盐缓冲液（PBS，pH 6.8 - 7.2）1:9 的比例混合，充分混匀配制成工作液。染液配制量依据样本数量和染色容器大小而定，确保能完全覆盖细胞样本。
染色：向细胞沉淀中加入适量配制好的 Giemsa 工作液，轻轻吹打使细胞悬浮均匀，室温下染色 15 - 30 分钟。染色过程中，Giemsa 染料中的亚甲蓝、伊红等成分与细胞内不同物质结合，使细胞各部分呈现不同颜色，便于观察细胞形态。染色结束后，用 PBS 缓慢冲洗细胞 3 - 5 次，每次冲洗时间约 1 - 2 分钟，以去除未结合的染料，直至冲洗液基本无色。
四、观察与结果判断
制片：取一滴染色后的细胞悬液滴在载玻片上，盖上盖玻片，尽量避免产生气泡。若细胞悬液浓度过高，可适当稀释后再制片；若浓度过低，可离心浓缩后制片。
显微镜观察：将制备好的玻片置于光学显微镜下，先使用低倍镜（如 10× 物镜）寻找细胞分布均匀的区域，再转换至高倍镜（如 40× 物镜）下仔细观察细胞形态。正常细胞的细胞核染色质分布均匀，呈淡蓝色或深蓝色，细胞质呈淡红色；凋亡细胞的细胞核染色质浓缩、边缘化，呈致密浓染的蓝色块状，部分细胞可见凋亡小体，呈大小不一的蓝色小体，游离于细胞外或仍与细胞相连。通过计数正常细胞与凋亡细胞的数量，可计算细胞凋亡率，公式为：凋亡率 =（凋亡细胞数 / 总细胞数）× 100% 。
原创作者：上海富衡生物科技有限公司
