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技术文章
上海富衡 | NCTC clone 929 细胞培养全攻略
点击次数：2852 发布时间：2024/12/15 10:00:36
NCTC clone 929 细胞，也被称为 L-929 细胞，是一种常用的成纤维细胞系，在生物医学研究领域应用广泛。以下是其详细培养步骤：
前期准备：
细胞培养需在无菌环境中进行，准备好超净工作台，并提前紫外照射消毒 30 分钟以上。培养器具如培养瓶、移液管、离心管等均需高压灭菌处理。选择合适的培养基，一般为含 10% - 15% 胎牛血清的 MEM 培养基，添加适量的青霉素（100 U/mL）和链霉素（100 μg/mL）以防止细菌污染，还可加入 2 mM 的 L - 谷氨酰胺维持细胞生长所需营养。
细胞复苏：
从液氮中取出冻存的 NCTC clone 929 细胞，迅速放入 37℃水浴锅中，轻轻晃动，使其在 1 - 2 分钟内快速解冻。将解冻后的细胞悬液转移至含有预热培养基的离心管中，1000 rpm 离心 5 分钟，弃去上清液，用新鲜培养基重悬沉淀，接种于培养瓶中，置于 37℃、5% CO₂培养箱中培养。
细胞传代：
当细胞在培养瓶中生长至 80% - 90% 汇合度时，需进行传代。先弃去旧培养基，用 PBS 缓冲液轻轻冲洗细胞 2 - 3 次，去除残留的培养基和血清。加入适量的胰蛋白酶 - EDTA 消化液，覆盖瓶底，在显微镜下观察，当细胞变圆、间隙增大时，立即加入含血清的培养基终止消化。将细胞悬液转移至离心管，1000 rpm 离心 5 分钟，沉淀用新鲜培养基重悬后，按合适比例传代至新的培养瓶中，放回培养箱继续培养。
细胞冻存：
取对数的细胞，消化离心后，用冻存液（含 20% 胎牛血清、10% DMSO 的培养基）重悬，调整细胞密度至 1 - 5 × 10⁶/mL，分装入冻存管中，标记好细胞名称、代数、冻存日期等信息。将冻存管先置于 4℃冰箱 30 分钟，再转入 - 20℃冰箱 2 小时，接着放入 - 80℃冰箱过夜，转移至液氮中保存。
培养注意事项：
培养过程中要定期观察细胞形态和生长状态，若发现细胞有污染迹象（如培养基浑浊、细胞形态异常等），应立即丢弃并排查污染源。传代时操作要轻柔，避免过度消化导致细胞损伤。同时，要保证培养箱内的温湿度和 CO₂浓度稳定，为细胞提供良好的生长环境。
原创作者：上海富衡生物科技有限公司
