检测原理

试剂盒采用双抗原一-步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA) 。往预先包被病毒抗ti的包被微孔中，依次加入标本、HRP标记的检测抗原，经过温育并彻di洗涤。用底物TMB显色，TMB在化物酶的催化下转化成蓝色，并在suan的作用下转化成终的黄色。用酶标仪在450NM波长下测定吸光度(OD值) ，与CUTOFF值相比较，从而判定标本中病毒(BVDV) 的存在与否。

样品收集、处理及保存方法

1.血清:使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.血浆: EDTA、柠檬suan盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液: 3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转 离心10分钟取上清。

5.保存:如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20°C， 避免反

复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

1.酶标仪(450NM)

2.高精度加样器及枪头: 0.5-10UL、 2-20UL、 20-200UL、 200-1000UL

3.37℃恒温箱

操作注意事项

1.试剂盒保存在2-8°C，使用室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完quan溶解后再使用。

2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封(低温干燥)保存。

3.预处理后的样本请按照操作步骤用样ben稀释ye适当稀释以达到试剂盒的检测效果。.

4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.所有液体组分使用充分摇匀。

常用方法：

1. 夹心法：

夹心法常用于检测大分子抗原，一般的操作步骤为:

a. 将具有一性的抗ti固著（coating）于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待测检体，检体中若含有待测的抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗ti进行一性键结

c. 洗去多余待测检体，加入另一种对抗原一的一次抗ti，与待测抗原进行键结

d. 洗去多余未键结一次抗ti，加入带有酶的二次抗ti，与一次抗ti键结

e. 洗去多余未键结二次抗ti，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果

原理：针对抗原分子上2个不同抗原决定簇的单克隆抗ti分别作为固相抗ti和酶标抗ti，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物。

2. 间接法

间接法常用于检测抗ti，一般的操作步骤为：

a. 将已知的抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余的抗原。

b. 加入待测检体，检体中若含有待测的一次抗ti，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行一性键结。

c. 洗去多余待测检体，加入带有酶的二次抗ti，与待测的一次抗ti键结。

d. 洗去多余未键结二次抗ti，加入酶底物使酶呈色，藉仪器（ELISA reader）测定塑胶盘中的吸光值（OD值），以评估有色终产物的含量即可测量待测抗ti的含量。

原理：利用酶标记的抗抗ti以检测已与固相结合的受检抗ti。

3. 竞争法

竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，其操作步骤为：

a. 将具有一性的抗ti固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗ti进行一性键结

c. 加入带有酶的抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗ti进行一性键结，由于塑胶孔盘上固著的抗ti数量有限，因此当检体中抗原的量越多，则带有酶的抗原可键结的固著抗ti就越少，亦即，两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗ti键结，即所谓竞争法之由来。

d. 洗去检体与带有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，当检体中抗原量越多，代表塑胶孔盘内留下之带有酶的抗原越少，显色也就越浅。

e. 当需要侦测无法获得两种以上单一性抗ti的抗原，或是不易得到足够的纯化抗ti以固著于孔盘上时，一般会考虑使用竞争法ELISA。

免责声明：

1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。

2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

Guangzhou Oslai Biotechnology Co., Ltd. has made efforts to develop into a commercial biotechnology engineering company. The company has an experimental technology development platform, antigen ａnd antibodyresearch ａnd development systems, ａnd is proficient in various enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) technologies. Combined with the company＇s R&D team, the company can provide ELISA kits, biochemical reagents, biochemical kits, molecular biology reagents ａnd kits,variousantibody ａnd immunological kits Multiple categories of products, including experimental consumables, involve various fields of life sciences such as molecular biology,cell biology, immunology, etc.

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