规格：96T/48T
包装：盒

检测原理：采用双抗夹心法

保质期：六个月

产品保存条件：2-8°C

应用范围：仅供科研研究实验使用

样品形式：血清/血浆/组织匀浆/细胞培养上清/其它生物液体（具体情况请咨询）

标本的采集及保存

1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

3.尿液：用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2⁻⁷.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并 放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

标本要求：

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3辣根化物酶的（HRP）活性。

试剂盒组成：

48孔配制：

1.说明书:1份

2.封板膜:2片（48）

3.密封袋:1个

4.酶标包被板:1×48 (2-8℃保存)

5.标准品:0.5ml×1瓶(2-8℃保存)

6.标准品稀释液:1.5ml×1瓶(2-8℃保存)

7.酶标试剂:3ml×1瓶(2-8℃保存)

8.样品稀释液:3ml×1瓶(2-8℃保存)

9.显色剂A液：3ml×1瓶(2-8℃保存)

10.显色剂B液：3ml×1瓶(2-8℃保存)

11.终止液：3ml×1瓶(2-8℃保存)

12.浓缩洗涤液：（20ml×20倍）×1瓶(2-8℃保存)

96孔配置：

1.说明书:1份

2.封板膜:2片（96）

3.密封袋: 1个

4.酶标包被板:1×96 (2-8℃保存)

5.标准品:0.5ml×1瓶(2-8℃保存)

6.标准品稀释液:1.5ml×1瓶(2-8℃保存)

7.酶标试剂:3ml×1瓶(2-8℃保存)

8.样品稀释液:3ml×1瓶(2-8℃保存)

9.显色剂A液：3ml×1瓶(2-8℃保存)

10.显色剂B液：3ml×1瓶(2-8℃保存)

11.终止液：3ml×1瓶(2-8℃保存)

12.浓缩洗涤液：（20ml×20倍）×1瓶(2-8℃保存)

需要自备的试剂和器材

1.37℃恒温箱。

2.标准规格酶标仪。

3.精密移液器及一次性吸头

4.蒸馏水，

5.一次性试管

6.吸水纸

操作步骤

1、标准品的稀释：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在、第二孔中分别加标准品100µl，然后在、第二孔中加标准品稀释液50µl，混匀；然后从孔、第二孔中各取100µl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50µl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50µl弃掉，再各取50µl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50µl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50µl，混匀后从第七、第八孔中分别取50µl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50µl，混匀后从第九第十孔中各取50µl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50µl，浓度分别为9mmol/L，6 mmol/L，3 mmol/L，1.5mmol/L， 0.75 mmol/L）。

2、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品10µl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4、配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30后弃去，如此重复5次，拍干。

6、加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。

7、温育：操作同3。

8、洗涤：操作同5。

9、显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10、终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

洗板方法

手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。

自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

注意事项：

试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。

封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

底物请避光保存。

严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

本试剂不同批号组分不得混用。

如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

计算：

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，

在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD

值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释

倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标

准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值

代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释

倍数，即为样品的实际浓度。

检测范围、 OD值：

具体请咨询在线客服，或者来电索要详细说明书！

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