OK 负鼠肾上皮细胞

细胞介绍

种属:成年雌性负鼠

细胞来源：国家资源库

细胞形态: 上皮样,贴壁生长。

含量：>1x106 细胞数

规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

用途：仅供科研使用。

细胞背景：OK 是从成年雌性负鼠的近端小管中分离出来的上皮细胞系。此细胞株*初是为研究 X 染色体失活时提供 X 染色体，随后发现它是极好的肾近曲小管上皮细胞的细胞培养模型。此细胞在培养时表达多种受体，α 2 肾上腺素能表达;心房利钠肽(ANP)表达;5 -羟色胺,表达;甲状旁腺激素(PTH)表达;α 2 肾上腺素能;5 -羟色胺;甲状旁腺激素;心钠肽(ANP)。并被广泛地用作研究这些受体的模型。

培养条件:

1）准备 DMEM + FBS 10% +P/S 1%

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37 摄氏度，培养箱湿度为 70%-80%。

贴壁细胞参考：

一. 收货后消毒静置待细胞全部稳定后拍照。弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

二. T25 瓶加入 0.25％EDTA 胰蛋白酶 1-2ml 于培养瓶中震荡混匀，如果属于贴壁不牢固的细胞很容易脱落的就培养箱外面消化震荡等脱落 90%以上终止消化，一般小于 1分钟以内，甚至不加胰酶有部分贴壁非常不牢固的细 胞也会自然震荡脱落。如果是贴壁牢固的细胞则置于 37℃培养箱中消化提高效率，每 40-50 秒拿出培养箱震荡

注意事项：

帮助细胞脱落，如果脱落 90%以上则对应 3-6ml 含有 10%血清的完全培养基终止，以防胰酶残留。如果贴壁 非常牢固的细胞，脱落的比例比较低，也不超过2分钟后终止消化，再加入 1ml 完全培养基让细胞缓冲后再过2分钟进行二次消化，反复分步消化以降低单次消化时长，减少刺激，保护细胞膜。或采用刮产刮细胞的方式处理也可以。总归原则是达到消化目的的同时减少细胞膜受到的损伤越小越好。

三.消化完成后轻轻吹匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 3-5min，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。将细胞悬液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶/6cm 培养皿中，添加 6-8ml 按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按 1:2~1:5 的比例进行。期间多的细胞一定保存多份细胞冻存管备种。

运输形式：

常温发货：收到后 T25 瓶消毒再放置培养箱静置 2-6 小时后观察密度和状态并拍照 2-3 张反馈给销售，密度达标就可以传代。前期传代比例 1:2，等再次长满后传代时建议冻存其中一整瓶成 1 个 1ml 冻存管，另外一瓶继续传代，反复冻存足量种子后才扩增做实验，以防突发情况引起断种。

干冰发货：常规细胞发货冻存管 2 只，复苏1只，另外一只备用，个复苏不成功时严格按照厂家要求复苏第二个，均没有复苏成功的情况及时留存复苏照片通知销售处理售后问题。

生物安全：

1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。