人结肠成纤维细胞永生化

一．产品简介

1、产品名称：永生化人结肠成纤维细胞

2、组织来源：结肠组织

3、产品规格：25cm2培养瓶/5×105cells

4、细胞简介：

永生化人结肠成纤维细胞分离自结肠组织；结肠在右髂窝内续于盲肠，在第3骶椎平面连接直肠。结肠分升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠4部分，大部分固定于腹后壁，结肠的排列酷似英文字母“M”，将小肠包围在内。结肠横切面由内到外依次为：黏膜（上皮层、固有层、黏膜肌层），黏膜下层（疏松结缔组织），肌层（内环形、外纵行两层平滑肌），外膜（纤维膜或浆膜）。结肠成纤维细胞主要分布于外膜（纤维膜或浆膜）结缔组织内。成纤维细胞分泌富含I型和III型胶原的非刚性细胞外基质。该细胞负责结蹄组织中细胞外基质的大量合成。许多疾病均与成纤维细胞有关，或是因为该细胞可涉及这些疾病的病因学，或是因为呈纤维化会对组织中其它细胞类型造成伤害。

本公司生产的永生化人结肠成纤维细胞采用混合酶和SV40T制备而来，细胞总量约为5×105个/瓶；细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

5、培养基信息：

培养基内容：基础培养基、FBS、Penicillin、Streptomycin等；

为保证细胞体外培养*佳状态我们推荐使用人结肠成纤维细胞专用培养基作为体外培养人结肠成纤维细胞专用培养基。

使用方法

在技术部标准操作流程下，永生化人结肠成纤维细胞可传20代；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。

一、客户收到细胞操作如下

取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态；

观察细胞生长情况，细胞密度低于80%时，贴壁细胞倒去瓶中培养液，留下8ml作用继续培养；细胞密度大于80%时，即可进行传代；

吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS洗涤3次；

添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，37℃温浴2-3min左右；倒置显微镜下观察细胞回缩变圆，透亮时即可终止消化，加入双倍完全培养液轻轻吹打细胞使其变成单细胞悬液；

收集细胞悬液至离心管内，1000rpm离心5min，观察细胞沉淀；

加入1ml的完全培养液，轻轻吹打成单细胞悬液，均匀分配至细胞培养瓶中，初次传代建议按照1：2比例进行

待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。

二、细胞冻存管复苏

提前室温预热培养基，将水浴锅调至37℃；

在超净工作台内提前准备好15ml离心管，并加入5ml的完全培养基；

将冻存管快速放入水浴锅中，不断晃动冻存管，直至管内冰块全部融化

然后快速取出，喷洒酒精，转移至超净工作台；

拧开冻存管螺纹盖，用移液枪将细胞悬液轻轻吸出，转移至含5ml完全培养基的15ml心管中，1000rpm离心5min；

离心结束后，观察有无细胞沉淀，将上清弃去，加入1ml新鲜的完全培养基，用移液枪轻轻吹打成细胞悬液；将细胞悬液转移至T25培养瓶中，T25培养瓶建议培养基加入量5⁻⁷ml，轻轻晃动培养瓶使细胞分散均匀，置于培养箱中培养。

细胞冻存

冻存条件：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO或者无血清冻存液

保存条件：液氮存储

四、注意事项

培养基于4℃条件下可保存3-6个月；

细胞收到操作注意事项，请参考《细胞操作指导》

细胞售后政策，请参考《原代细胞售后告知书》

由于使用所用试剂、操作环境、操作手法不同，以上仅供各实验室参考！