NCI-H441-GFP-Puro+ffluc稳转株（STR鉴定）

产品名称：NCI-H441-GFP-Puro+ffluc稳转株（STR鉴定）

培养条件：准备RPMI-1640 + 10％ FBS。

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

细胞特征：形态：上皮细胞样，贴壁生长

稳转基因名称：萤火虫荧光素酶，Firefly luciferase，ffluc

序列：QBQ18417.1

荧光蛋白： GFP

细胞株抗性：嘌呤霉素抗性（Puro R）

细胞株类型：混合稳转（√）；单克隆株（x）

冻存条件：无血清冻存液。

细胞检测：不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

供应限制：仅供科研使用

运输方式：常温或冻存（T25瓶或者1mL冻存管包装）

备注：如混合稳转细胞株带抗性基因，建议每传 8～10 代用相应抗性药物筛选一次 ；或在细胞培养过程中添加适当浓度的抗性药物以维持细胞株阳性率 。

注意事项：细胞接收后的处理：

1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

冻存细胞的复苏：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

1.吸去培养液，加PBS清洗1-2遍，去PBS。加入0.25%胰酶2ml消化15秒，去胰酶。将培养瓶放37度培养箱，靠残余胰酶继续消化细胞3-10分钟直至细胞变圆（每3分钟观察一次。）

2.加12ml完全培养基，吹打均匀，即可分到2个T25培养瓶里。（细胞1传2，若顾客使用培养皿或培养孔板，建议先包被）

细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例；

细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.

1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后次传代建议T25培养瓶1：2传代 。

使用须知：

1）本产品仅供购买方单方使用，不得向任何第三方赠送、转让或销售；

2）本产品仅供实验室和体外研究使用，不能用于任何临床检验、诊断、治疗，或任何非法用途；

3）收货 48 h 内如若发现异常，请及时联系售后，逾期视为收货良好；

4）请严格按照本说明书操作，否则造成细胞失活等情形，不予提供补发服务。