CIK草鱼肾脏细胞

背景描述：草鱼肾脏细胞系(CIK)来源于鲤科鱼类草鱼(Ctenopharyngodon idellus)的肾脏组织，属于贴壁生长型上皮样细胞。该细胞系广泛应用于水生动物病毒学领域，常用于草鱼呼肠孤病毒(GCRV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)等病原体的增殖研究、致病机制解析及疫苗制备，具有体外培养稳定性高、病毒敏感性强的特性。

培养条件：准备MEM培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：28摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

细胞特征：来源：肾脏组织

形态：上皮细胞样 贴壁生长

该细胞来源草鱼肾组织，28℃左右生长稳定，对草鱼出血病左右病毒FRV具敏感性。

冻存条件：无血清冻存液。

细胞检测：不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

供应限制：仅供科研使用

运输方式：常温或冻存（T25瓶或者1mL冻存管包装）

注意事项：细胞接收后的处理：

1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于28℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

3）贴壁细胞：细胞在28℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

冻存细胞的复苏：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在28℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中28℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

1.吸去培养液，加PBS清洗1-2遍，去PBS。加入0.25%胰酶2ml消化15秒，去胰酶。将培养瓶放37度培养箱，靠残余胰酶继续消化细胞3-10分钟直至细胞变圆（每3分钟观察一次。）

2.加12ml完全培养基，吹打均匀，即可分到2个T25培养瓶里。（细胞1传2，若顾客使用培养皿或培养孔板，建议先包被）

细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例；

细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.

1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后次传代建议T25培养瓶1：2传代 。