本试剂盒只能用于科学研究, 不得用于医学诊断

土壤 （soil） β-1 ,4-葡萄糖苷酶 （β-G） ELSA检测试剂 盒

使用说明书

检测原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往 预先包被β-1,4-葡萄糖苷酶 （β-G） 抗体的包被微孔中 ，依次加入标 本 、标准品 、HRP标记的检测抗体 ，经过温育并彻底洗涤 。用底物 TMB显色 ，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色 ，并在酸的作用 下转化成最终的黄色 。颜色的深浅和样品中的β-1,4-葡萄糖苷酶 （β -G）呈正相关 。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计 算样品活性 。

样品收集 、处理及保存方法

1. 样本不能含叠氮钠（NaN3）， 因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧 化物酶（HRP） 的抑制剂 。

2. 标本采集后尽早进行提取 ，提取按相关文献进行 。

3. 植物萃取液或其它相关样本：请1000 x g离心20分钟，取上清即 可检测 。

4. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于

-20℃ , 避免反复冻融 ，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻 。

自备物品

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL 、2-20uL 、20-200uL 、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

操作注意事项

1. 试剂盒保存在 2-8℃ , 使用前室温平衡 20 分钟 。从冰箱取出的 浓缩洗涤液会有结晶 ，这属于正常现象 ，水浴加热使结晶完全溶解 后再使用 。

2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存 。

3. 浓度为 0 的 S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明 书操作时样本已经稀释5 倍 ，最终结果乘以 5 才是样本实际浓度 。

4. 严格按照说明书中标明的时间 、加液量及顺序进行温育操作 。

5. 所有液体组分使用前充分摇匀 。

试剂盒组成

注 ：标准品（S0-S5）浓度依次为 ：0 、2.5 、5 、10 、20 、40 U/mL

试剂的准备

20×洗涤缓冲液的稀释 ：蒸馏水按 1： 20 稀释， 即 1 份的 20×洗涤 缓冲液加 19 份的蒸馏水 。

洗板方法

1. 手工洗板：甩尽孔内液体 ，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽

孔内液体 ，在吸水纸上拍干 ，如此洗板 5 次 。

2. 自动洗板机 ：每孔注入洗液 350µL ，浸泡 1min ，洗板 5 次 。

操作步骤

1. 从室温平衡 20min后的铝箔袋中取出所需板条 ，剩余板条用自 封袋密封放回 4℃ 。

2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50µL； 3. 样本孔先加待测样本 10µL，再加样本稀释液 40µL；空白孔不加 。 4. 除空白孔外 ，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶 （HRP） 标记的检测抗体 100µL， 用封板膜封住反应孔， 37℃水浴 锅或恒温箱温育 60min 。

5. 弃去液体， 吸水纸上拍干 ，每孔加满洗涤液 ，静置 1min ，甩去 洗涤液， 吸水纸上拍干 ，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。

6. 每孔加入底物 A 、B 各 50µL ，37℃避光孵育 15min 。

7. 每孔加入终止液 50µL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值 。

试剂盒性能

1. 准确性 ：标准品线性回归与预期浓度相关系数 R 值， 大于等于 0.9900 。

2. 灵敏度 ：最低检测浓度小于 1.0 U/mL 。

3. 特异性： 不与其它可溶性结构类似物交叉反应 。

4. 重复性 ：板内 、板间变异系数均小于 15% 。

5. 贮藏 ：2-8℃ , 避光防潮保存 。

6. 有效期： 6 个月

免责声明

1. 试剂盒仅供研究使用， 不得用于临床实验或人体实验， 否则所 产生的一切后果， 由实验者承担 ，本公司概不负责 。

2. 严格按照说明书操作， 实验者违反说明书操作 ，后果由实验者 承担 。

格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者 承担。