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LBA4404感受态（电转）
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价格：￥电议
更新日期：2026/8/7 17:13:02
生 产 地：中国大陆
产品型号：EC96302
商家名片
张**
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详细内容
产品简介
LBA4404菌株为 Ach5型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因 Rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的章鱼碱型 Ti 质粒 pAL4404，此质粒含有 vir 基因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基因组必需的元件，pAL4404 质粒自身的 T-DNA 转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体 TDNA 顺利转移)。 pAL4404 型 Ti 质粒含有筛选标签：Strep，赋予 LBA4404 菌株链霉素抗性，适用于菸草、番茄、烟草等植物的转基因操作。本公司开发的 LBA4404 电转感受态特别适用于大质粒的转化：经 pCAMBIA2301 质粒 (size:11633 bp)检测转化效率>105 cfu/μg DNA。
产品组成
组分
LBA4404
电转感受态细胞
10 × 50μL
100 × 50μL
定制
基因型：Ach5 (RifR) Ti pAL4404 (StrepR) Ocine
存储条件
-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
质量控制
除章鱼碱型 Ti 质粒 pAL4404 外，无外源质粒 DNA 残留；
电转法转化效率≥105 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 将新的 2 mm 电击杯插入冰中预冷；或者将储存于 75%乙醇中的 2 mm 电击杯和杯盖取出，在超净工作台中将其倒置于干净的吸水纸上，使乙醇充分挥发，然后插入冰中预冷；
2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中待其融化，加入 0.01-1μg 质粒 DNA（体积不大于 5μl），用 200μl 枪头将感受态-质粒混合物快速转移到预冷的电击杯中，盖上杯盖；
3. 开启电转仪，设置参数（2500 V ，200 Ω，25μF），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成后快速插入冰中，加入 900μl 无抗生素的 YEB 并将感受态细胞转移到无菌空管中，28 ℃振荡培养 2~3 小时。（注：此电转化参数为 Bio-rad 推荐，使用者也可使用电转仪所推荐的 Protocol 进行操作）
4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100μl 左右上清将菌体轻轻吹匀，并涂布于含相应抗生素的 YEB 平板上，倒置放于 28℃培养箱培养 2~3 天（当平板只含有 50μg/ml Kan 时，28℃培养 48 h 即可；平板中同时加入 50μg/ml Kan，20μg/ml Rif 时，需 28℃培养 60h；如果使用的平板含有 50μg/ml Rif 时，则需要 28 ℃培养 72~90 h）。
注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用；
2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；
3. 利福平浓度不应高于 25μg/μl，利福平浓度过高不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率；
4. 由于 Ti 质粒丢失的概率低（可以忽略），所以相关抗性基因可以不用添加。
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