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当前位置：阿仪网>上海初态生物科技有限公司>技术文章>果糖 1,6- 二磷酸醛缩酶紫外分光光度法2022已更新

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技术文章

果糖 1,6- 二磷酸醛缩酶紫外分光光度法2022已更新

点击次数：3442 发布时间：2022/6/11 19:36:33

 货号：CT-C-B210                                                  规格：50管/48样

果糖 1,6- 二磷酸醛缩酶

（Fructose 1,6 bisphosphate aldolase，FDA）试剂盒说明书

紫外分光光度法

注意：正式测定之选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

果糖 1,6-二磷酸醛缩酶（EC4.1.2.13）是糖酵解和糖异生途径中的重要酶，催化果糖 1,6-二磷酸可逆的裂解为磷酸二羟丙酮和 3-磷酸甘油醛，广泛存在于动植物及微生物体内，为生

物体合成代谢提供能量。

测定原理

果糖 1,6-二磷酸醛缩酶催化果糖 1,6-二磷酸生成 3-磷酸甘油醛和磷酸二羟丙酮，在磷酸丙糖异构酶和 α-磷酸甘油脱氢酶作用下催化 NADH 和磷酸二羟丙酮生成 NAD 和 α-磷酸甘油，340nm 处吸光值的变化可反映果糖 1,6-二磷酸醛缩酶活性的高低。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿。

试剂组成和配制

提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 25mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用加 5mL 蒸馏水充分溶解。

试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用加 5 mL 蒸馏水充分溶解。

试剂四：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用加 5 mL 蒸馏水充分溶解。

试剂五：液体×1 瓶，4℃避光保存。

酶液提取

1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入1mL

提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，10000g 离心 10min，取上清置冰上待测。

2. 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3，间隔7，总时间3min）；然后 4℃，10000g 离心 10min，取上清置冰上待测。

3. 液体：直接检测。

测定操作

1. 分光光度计预热 30min，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2. 取1mL石英比色皿，依次加入500μL试剂一，100μL试剂二，100μL试剂三，100μL试剂四，100μL试剂五，100μL粗酶液，充分混匀，记录 40nm处10s的吸光值A1和310s的吸光值A2，△A=A1-A2

 

 

 

 

计算公式

（1）按照样本蛋白浓度计算

酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

FDA（nmol/min /mg prot）= ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T

=321.54×ΔA÷Cpr

（2）按照样本质量计算

酶活单位定义：每克组织每分消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

FDA（nmol/min /g）= ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T

=321.54×ΔA÷W

（3）按照细胞数量计算

酶活单位定义：每 104个细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

FDA（nmol/min /104cell）= ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总) ÷T

= 321.54×ΔA÷细胞数量

（4）按照液体体积计算

酶活单位定义：每毫升液体每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

FDA（nmol/min /mL）= ΔA÷（ε×d）×V 反总÷V 样÷T=321.54×ΔA

V 反总：反应体系总体积，1mL；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10 3 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g

注意事项

配制好的试剂二、试剂三、试剂四 3 天内使用完。

生化试剂盒, 辅酶Ⅰ系列kits, 试剂盒

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