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公司新闻
开年上新 | 尚恩生物细胞转染服务正式上线啦!!
点击次数：381发布时间：2025/2/17 14:51:29
01 细胞转染概述及应用 细胞转染是指将外源的基因如DNA、RNA等采用各种化学、生物学或物理方法导入真核细胞的技术。是生物医学研究的重要工具，广泛应用于以下方面： ■研究基因功能 通过导入特定研究的目的基因，使目的基因过表达，研究其在细胞中的高表达情况下细胞功能的影响。或者利用siRNA或shRNA使目的基因不表达或者表达降低，研究基因缺失情况下对细胞功能的影响。 ■蛋白质表达生产 通过转染编码所需目的蛋白的基因，进行蛋白质表达及纯化，也可以通过融合荧光蛋白，研究目的蛋白在细胞内的分布或者定位。 ■细胞工程 通过转染和筛选，获得能够稳定表达外源基因的细胞系，即构建稳转细胞株。 ■药物筛选与毒性测试 转染特定基因，从而验证药物靶点的有效性。通过高通量筛选，筛选出潜在药物。 ■基因治疗 导入或者修复基因，治疗一些遗传病，也可转染编码抗原基因，进行疫苗研发。 02 细胞转染分类 Part.1 按导入的核酸存在于宿主细胞的时间长短， 分为瞬转和稳转。 瞬转：外源基因得以表达但它们并不会整合到宿主细胞的基因组中，随细胞分裂逐渐丢失。 稳转：外源基因能够整合到细胞的基因组中，随细胞分裂持续表达，使得转染细胞的子代细胞也同样表达外源基因。 二者区别： 区别 瞬转 稳转 目的不同 短时间获得高水平的基因表达 获得稳定表达目的基因的细胞株 稳定性不同 瞬时转染由于基因未整合到染色体体，稳定性较差 由于经过筛选，目的基因整合到染色体中，其稳定性好 方法不同 一般采用脂质体转染法 一般更偏向于病毒转染、电转等方法 筛选过程不同 转染后一般不需要进行筛选 一般需要经过筛选，挑选出目的基因整合到宿主染色体中的细胞 质粒不同 质粒不需要带有抗性 一定要带有特定的抗性以便于后续的克隆株筛选 表达时效不同 目的基因的表达通常持续几天，不能稳定遗传 长时间稳定表达目的基因 实验周期不同 转染后24h-96h收细胞 2-3周甚至3-4周筛选出稳转细胞克隆 Part.2 按照方法分为物理介导法、化学介导法， 生物介导法。 物理介导法：通过物理的方法（例如电穿孔法、显微注射法）直接将外源核酸导入到细胞内，一般不需要使用任何化学物质。效率较高，但对细胞损伤大，细胞存活率低。 化学介导法：通过使用一些化学物质，如PEI、脂质体等，来改变细胞膜的物理和化学性质，使其对外源性DNA或RNA具有亲和力，从而实现基因转移。这种方法实验操作简单，周期短，但大多数不能长期稳定表达外源基因。 生物介导法：一般利用病毒作为载体，将外源基因包装后导入细胞，如慢病毒、腺病毒、逆转录病毒。这种方法可以实现外源基因的长期稳定表达，也可进行体内、体外高效、特异性的基因转移。但实验操作较为繁琐，实验周期较其他方法长。 由此看来，细胞转染方法多种多样。选择哪种转染方法，取决于实验需求、实验室条件、细胞的类型和转染效率等因素。 目，大多数实验室使用较多的主要有化学介导中的脂质体转染（质粒转染）和生物介导中的慢病毒转染法。质粒转染操作简单，但有些细胞系不容易转染，转染效率低，给实验带来很多不便。而病毒转染具有能够稳定表达，宿主范围广的优势，且其对非分裂的原代细胞、干细胞等具有较高的转染效率，同时体内外实验均有效，同样适用于体内活体动物实验，如动物成瘤等。 1 END 1
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