可用抗体同源血清全IgG抗体与细胞充分混匀，室温孵育10-20min。
每管加入稀释后的一抗溶液100μL，2-8℃反应30min，孵育期间每隔10min晃动一下反应管，使细胞和抗体充分反应。若为直标抗体，需要避光反应，跳到步骤7。抗体稀释液为0.5%BSA/PBS溶液。
300g离心5min，去上清后加入200μL 0.5%BSA/PBS溶液重悬，离心去上清，重复两遍。
对于非荧光染料直标抗体，加入100μL荧光二抗重悬，避光2-8℃反应30min，孵育期间每隔10min晃动一下反应管。
将收集的细胞用1mL 0.5%BSA/PBS溶液重悬，300g离心5min，去上清，重复2次；用0.5%BSA/PBS溶液重悬细胞至浓度1x107个细胞/mL，取100μL细胞悬液置于流式管内，300g离心5min去上清。
每管加入100μL细胞固定剂重悬细胞，2-8°孵育20min。固定剂可用4% 多聚甲醛。
600g离心5min，去上清后加入200μL 0.5%BSA/PBS溶液重悬，离心去上清，重复两遍。
每管加入100μL细胞通透剂重悬细胞，室温孵育20min。通透剂可用0.5%BSA/PBS（0.3%TritonX-100）
600g离心5min，去上清后加入200μL 0.5%BSA/PBS溶液重悬，离心去上清，重复两遍。
用抗体同源血清全IgG抗体与细胞充分混匀，室温10-20min。
每管加入稀释后的一抗溶液100μL，2-8℃反应30min，孵育期间每隔10min晃动一下反应管，使细胞和抗体充分反应。若为直标抗体，需要避光反应，跳到步骤11。抗体稀释液为0.5%BSA/PBS溶液。
600g离心5min，去上清后加入200μL 0.5%BSA/PBS溶液重悬，离心去上清，重复两遍。
对于非荧光染料直标抗体，加入100μL荧光二抗重悬，避光2-8℃反应30min，孵育期间每隔10min晃动一下反应管。对于直标抗体直接跳到步骤11。
600g离心5min，去上清后加入200μL 0.5%BSA/PBS溶液重悬，离心去上清，重复两遍。
用200μL 0.5%BSA/PBS溶液重悬细胞，4℃保存，上机分析。
