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技术文章
流式、免疫荧光、免疫组化等实验用的抗体有什么区别？
点击次数：1507 发布时间：2025/11/3 15:27:25
流式、免疫荧光、免疫组化还有WB、ELISA等都是基于抗原抗体特异性反应的实验技术，其核心就是抗体，本质上都是一样的东西，只是由于仪器、原理、检测方式的差异，抗体的特异性、灵敏度、宿主、是否标记等方面有区别。
流式检测
1. 主要设备
流式细胞仪：流式细胞仪是一种在液流系统中快速检测单个细胞或多个微粒的多种物理和化学特性的生物医学仪器，它结合了流体学、光学、电子学和计算机科学等多种技术，能够对细胞进行多参数、定量的分析和分选。简单来说，它可以被视为一个 “细胞的超高速拍照和分拣系统” ，它让细胞排成单列逐个通过一个检测点，在瞬间对其进行“拍照”（检测光学信号），然后根据“照片”的特征，决定是否给这个细胞带上电荷，从而将其分选到指定的容器中。
2. 实验原理
通过荧光物质直接标记抗体，与细胞悬液孵育后，通过流式细胞仪激发并检测细胞上的荧光情况，进行结果分析或分选。属于抗体的直接法应用。
3. 抗体特性
大多采用精选高灵敏度、高特异性单克隆抗体，降低非特异性反应，提高检出率
多数抗体是针对细胞表面抗原，只有少数针对胞内抗原（需破膜）
荧光物质直接标记，直接法检测，无需复杂的酶标二抗、生物素等信号放大系统
4. 结果呈现
▲左：SNFA-311流式检测直方图 右：SNFA-311流式检测散点图
免疫荧光、免疫组化、WB及ELISA等实验
1. 主要设备
免疫荧光：荧光显微镜等
免疫组化：普通光学显微镜等
WB：电泳仪、转印仪、ECL发光检测仪或胶片等
ELISA：酶标板、酶标仪等
2. 实验原理
待样本处理好后，先与一抗抗体孵育结合，再通过通用酶标或荧光二抗与一抗抗体孵育结合，通过酶标或荧光二抗与底物或者激发光激发后检测。多属于抗体的间接法应用，需要配合二抗或者其他信号放大系统使用。
3. 抗体特性
纯化的单克隆抗体或者多克隆抗体，种属、特异性、灵敏度要求低于流式抗体
不同实验技术，可以检测胞内、胞外、细胞膜几乎所有部位的抗原
多数是间接法检测，检测结果一定程度受二抗、信号放大系统影响，实验周期长
4. 结果呈现
综上，流式抗体与常规免疫荧光、免疫组化等使用的抗体虽然本质上是一样的，但是由于技术需求不同，实际抗体性质、使用方式、检测内容等多方面参数都会有区别，需要根据自身实验需要甄别选择哦。
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