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技术文章
贴壁细胞培养时突然飘了很多怎么办？
点击次数：2845 发布时间：2024/3/25 14:17:16
同学们有没有遇到这种情况：辛辛苦苦培养了一批贴壁细胞，正准备美美地做实验，有一天突然发现细胞变少了！细胞并不是消失了，而是在培养液中大量漂浮着，像一群失去了方向的气球。你不知道该怎么办，只能无奈地看着细胞越养越少。别担心，小尚会告诉你原因和解决方法，建议速速放入收藏夹以备不时之需！
先，同学们需要了解，细胞漂浮是一个很常见的现象，细胞培养时有部分漂浮但细胞仍然正常生长，这种情况无需特殊处理。特别是呈岛状生长的细胞，漂浮细胞看起来会比较多，保持2-3天换液一次即可，换液的同时漂浮细胞顺便也被清除了。
但如果细胞突然大量漂浮，贴壁的部分明显减少，细胞不再生长，则需要按照下面的内容排查原因并正确处理。
看起来漂浮细胞较多，但贴壁细胞正常生长，并没有受到影响，正常培养即可
细胞大量异常漂浮，贴壁细胞状态不佳，需排查原因
1. 温度影响
细胞不能着凉哦！贴壁比较弱的细胞如果遇到了冷的环境，会皱缩甚至脱落，换液等操作之必须将培养基、PBS等试剂置于37度充分预热。细胞不能靠近冰冷的物品，不要将刚从冰箱拿出的物品放在细胞旁边。冬季尤其需要注意，未开空调的细胞房气温较低，细胞拿出培养箱观察的时间不能太长，否则长时间在低温环境下细胞也容易皱缩脱落。尽量控制观察次数，不要太频繁。
2. 传代操作的影响
若消化操作不当，细胞易受损，终死亡漂浮。细胞在传代消化的时候应该注意中和的时机。一般消化时每隔30s-1min拿出观察，直到部分细胞能自然脱落时再终止消化。避免消化不彻*，强行将细胞吹下造成损伤，同时也避免消过度造成损伤。中和吹打时注意枪头不要与细胞层接触，离心重悬时吹打次数不宜过多，力度要轻柔，吹打时可留少许液体在枪头内，避免产生气泡。
终止消化的时机
3. 培养基与血清的影响
若培养基、血清等培养试剂开封时间较长，培养箱CO2供气异常等情况，可能导致培养基pH值、渗透压异常、细胞因子降解等种种问题，从而导致细胞漂浮。
建议培养试剂开封后正确分装储存，并尽快使用。
血清对细胞贴壁起着至关重要的影响，血清不合适也可能导致细胞过多漂浮，此时应尝试不同品牌的血清，选择出合适的血清进行细胞培养。
CO2细胞培养箱要定期维护，保*细胞生长环境稳定。
4. 细胞密度影响
细胞密度过低或过高都可能影响细胞贴壁，过低时细胞生长减慢甚至无法生长终漂浮；细胞长满后未及时传代，长时间高密度培养，细胞将会受损漂浮。因此要注意接种密度不要过低，密度至80%及时传代。
密度过低
密度过高
5. 培养器皿的影响
一般来说，培养贴壁细胞需要使用表面处理过的器皿。所谓表面处理，就是通过特定的方法使器皿底部具有亲水性，有效提高细胞的贴壁性，大家购买培养器皿的时候需要多多留心。如果细胞贴壁太弱了，一碰就脱落，可以尝试用多聚赖氨酸、胶原蛋白等物质包被培养器皿，以增加细胞贴壁牢固度。
总之，如果发现细胞大量异常漂浮，排查原因并尽快处理通常可以解决。
原创作者：武汉尚恩生物技术有限公司
