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小鼠白介素1受体Ⅰ(IL-1R1)ELISA试剂盒
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ELISA试剂盒
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详细内容

小鼠白介素1受体Ⅰ(IL-1R1)ELISA试剂盒
白细胞介素1受体,I型(IL1R1)也被称为CD121a,是一种白细胞介素受体,IL1R1也表示其基因,该基因所编码的蛋白是一种细胞因子受体,属于白细胞介素-1受体家族,该蛋白是白细胞介素1α(IL1A)、白细胞介素1β(IL1B)和白细胞介素1受体拮抗剂(IL1RA)的受体,它是参与许多细胞因子诱导的免疫和炎症反应的一个重要媒介,该基因与白细胞介素1受体II型(IL1R2)、白细胞介素1受体样2(IL1RL2)和白细胞介素1受体样1(IL1RL1)一起构成了一个细胞因子受体基因簇,该区域映射到染色体2q12,白细胞介素1受体,I型已被证明与PIK3R1、Myd88和IL1RAP相互作用。
本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术 : 将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的待测物IL-1R1,清洗后,再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物,随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育,待孵育结束后清洗,接着加入TMB显色后,若样本中有待测物则显蓝色,加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在450 nm处测OD值,颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比,通过绘制标准曲线计算出样本中IL-1R1的浓度。
需要的其他材料
1. 酶标仪,包含450nm测定波长,同时包含600-680nm校正波长更佳;
2. 移液器及枪头;
3. 蒸馏水或去离子水;
4. 100-1000 mL刻度量筒;
5. 洗瓶、排枪或自动微孔板清洗机;
6.水平轨道微孔板振荡器,能够保持500±50 rpm的速度;
7. 用于稀释标准品和样品的试管。
样品保存
样品收集后若在1 周内进行检测的可保存于4℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(6个月内检测),避免反复冻融,标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
试剂准备工作
使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右。
洗涤液/稀释液配置
如果洗涤液/稀释液(20×)有晶体析出,需在37℃下加热⾄晶体全部溶解。用蒸馏水1:20稀释(例如:1mL 浓缩洗涤液加入19mL的蒸馏水)
所有标准品、样品建议复孔检测
1. 酶标板准备:确定试验所需要的孔数,取下未使用的酶标条放回装有干燥剂的铝箔袋。
2. 样本孵育:每孔分别加入100µL不同浓度的标准品以及预处理过的待测样品(建议样本用通用稀释液最少稀释1倍上样,目的是减少基质效应),盖上封板胶纸,37℃避光反应1 h。孵育结束后,每孔加入300µL 1×洗涤缓冲液,轻轻晃动30秒,甩干并在纸上拍干,以这种方式清洗3次。
3. 抗体孵育:每孔加入100µL生物素化抗体工作液,轻轻混匀,盖上封板胶纸,37℃避光反应1h。孵育结束后,重复步骤2中的清洗方式清洗4次。
4. 酶标孵育:每孔加入100µL 1×SA-HRP工作液,盖上封板胶纸,37℃避光反应30分钟,清洗4次,拍干。
5. 底物显色:每孔首先加入50µL显色液A,随后加入50µL显色液B,轻轻混匀,盖上封板胶纸,37℃避光反应15分钟。
6 .终止反应:待显色反应结束后,每孔加入50µL终止液,轻轻混匀,5分钟内用预热完成的酶标仪在450nm处测吸光值。
标准品配置
试剂盒中取出标准品,准备7个试管,先从40ng/mL标准品(200µL)按需吸取一定量用1×稀释液稀释至2000pg/mL(例:50µL的标准品母液+950µL的1×稀释液,制备得到1000µL的2000pg/mL浓度标准品),随后在6个试管中分别加入500µL的1×稀释液,在这6个单独的试管中将2000pg/mL标准品依次2倍倍比稀释至6个梯度,共配制7个浓度的标准品,依次为: 2000pg/mL、 1000pg/mL、 500pg/mL、 250pg/mL、 125pg/mL、 62.5pg/mL、 31.25pg/mL,从最高浓度标准品溶液中吸取500µL标准品到下一个试管中,轻轻吹打混匀,以此类推进行标准品的倍比稀释(如图所示),1×稀释液用作零浓度标准品(0pg/mL)。

抗体工作液配置
使用前10分钟,将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液,根据所需用量当日配置当日使用。
酶结合物工作液配置
使用前10分钟,将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液,根据所需用量配置。
备注:如待测样本中IL-1R1浓度高于标准品最高值,请根据实际情况选择适当的稀释倍数。
结果的计算
计算标准品和样本复孔的平均OD值并减去空白孔的OD值作为校正值。以浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。或者使用能够生成四参数逻辑(4-P)曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。若样品OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。
示例数据
以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
标准品浓度(pg/mL) | 2000 | 1000 | 500 | 250 | 125 | 62.5 | 31.25 | 0 |
OD值 | 2.453 | 1.606 | 0.979 | 0.67 | 0.479 | 0.204 | 0.13 | 0.064 |
校正OD值 | 2.389 | 1.542 | 0.915 | 0.606 | 0.415 | 0.14 | 0.066 | 0 |

下图所示标准曲线仅供示例,结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果
重复性
板内变异系数小于10%,板间变异系数小于10%。
小鼠白介素1受体Ⅰ(IL-1R1)ELISA试剂盒
灵敏度
经样本测试,本试剂盒的检测范围为31.25 - 2000pg/mL,灵敏度为15.63pg/mL。
特异性
该试剂盒测定可识别重组小鼠IL-1R1。
其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为50ng/mL,并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。
使用本ELISA试剂盒之前,请您必须完整阅读说明书(可咨询索取),本产品仅供科研使用,不得用于临床诊断和治疗。
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