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禽流感病毒H5H7新城疫病毒三重探针法qRT-PCR试剂盒

价格：￥电议

品牌名称：通蔚生物型号：原产地：中国大陆更新时间：2026/10/20 9:24:39

产品摘要：禽流感病毒H5H7新城疫病毒三重探针法qRT-PCR试剂盒即甲型流感病毒，属单股负链RNA病毒。该病毒感染禽类且容易在鸟类间流行，过去在民间称为“鸡瘟”，国际兽疫局将其定为甲类传染病，其中H5和H7型为高致病性毒株可造成急性禽流感。

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详细内容

禽流感病毒H5H7新城疫病毒三重探针法qRT-PCR试剂盒
产品特点
禽流感病毒H5H7新城疫病毒三重探针法qRT-PCR试剂盒即甲型流感病毒，属单股负链RNA病毒。该病毒感染禽类且容易在鸟类间流行，过去在民间称为“鸡瘟”，国际兽疫局将其定为甲类传染病，其中H5和H7型为高致病性毒株可造成急性禽流感。又称欧洲鸡瘟，主要发生于鸡和火鸡，常突然爆发，无先兆症状就突然死亡，死亡率50%～100%。新城疫病毒(Newcastle Disease Virus，NDV）属单股负链RNA病毒。该病毒主要危害鸡、珠鸡和火鸡，在被侵袭的鸡群中迅速传播，强毒株可使鸡群全群毁灭。弱毒株仅引起鸡群呼吸道感染和产蛋量下降，但可迅速康复。禽流感病毒H5、H7型及新城疫病毒严重影响禽类健康造成养殖业的损失，因此快速检测禽流感病毒H5、H7型及新城疫病毒具有重要的意义。本产品就是以探针法qRT-PCR技术为基础开发的同时检测禽流感病毒H5、H7型及新城疫病毒的试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。

2. 引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以达到100拷贝/反应。

3. 提供阳性对照，便于排除假阴性结果。

4. 特异性高，引物和探针分别根据禽流感病毒RNA H5型、H7型以及新城疫病毒RNA高度保守区设计，不会跟其他生物的RNA发生交叉反应。

5. 既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为4个数量级。

6. 禽流感病毒H5型、H7型及新城疫病毒分别用FAM、ROX和HEX标记的三个探针检测。

7. 本产品足够50次20µL体系的探针法RT-PCR反应。

8. 本产品只能用于科研。

参数规格

成分	规格	包装
探针法qRT-PCR缓冲液	500µL	0.5mL蓝盖管
探针法qRT-PCR酶混合液v2	50µL	0.5mL红盖管
荧光PCR专用模板稀释液	1mL	1.5mL绿盖管
流感病毒H5/H7型及新城疫病毒三重RT-PCR引物-探针干粉	50次	0.5mL棕色管
禽流感病毒H5型阳性对照（1×10E7拷贝/µL	50µL	0.5mL棕色管
禽流感病毒H7型阳性对照（1×10E7拷贝/µL）	50µL	0.5mL棕色管
新城疫病毒阳性对照（1×10E7拷贝/µL）	50µL	0.5mL黄盖管
使用手册	1份	无
本产品采用十孔盒包装
注意：在使用前需要短暂离心引物-探针干粉管，然后在离心管中加入220uL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。

使用方法

一、稀释禽流感病毒H5型标准曲线样品（以10E1-10E6拷贝/µL这6个10倍稀释度为例）
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DN段作为阳性对照。

1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2，1。

2. 用带芯枪头分别加入45 µL荧光PCR专用模板稀释液，用带芯枪头，下同）。

3. 在6号管中加入5 µL 1×10E7拷贝/µL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/µL的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头，在5号管中加入5 µL 1×10E6拷贝/µL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/µL的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头，在4号管中加入5 µL 1×10E5拷贝/µL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E4拷贝/µL的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

禽流感病毒H5H7新城疫病毒三重探针法qRT-PCR试剂盒
二、稀释禽流感病毒H7型检测标准曲线样品

7. 操作同上，只是使用试剂盒提供禽流感病毒H7型阳性对照作为模板。得到6个浓度的样本放冰上待用，分别是B1-B6。

三、稀释新城疫病毒检测标准曲线样品

8. 操作同上，只是使用试剂盒新城疫病毒阳性对照作为模板。得到6个浓度的样本放冰上待用，分别是C1-C6。

四、样品RNA的制备

9. 如果有N个样品，设置N+4个提取，多出的3个是禽流感病毒H5型/H7型及新城疫病毒的PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用自备的、确定是阳性的样本作为样品制备阳性对照，可以用自备的、确定是阴性的样本作为样品制备阴性对照，可以用水替代。

10. 用自选方法纯化样品的RNA（含内参），本试剂盒跟市场上大多数RNA提取试剂盒兼容。

五、Probe RT-PCR反应（20µL体系，在样品制备室进行）

11. 如果有N+2个核酸提取，则设置N+3个RT-PCR反应，多出的一个是扩增阴性对照。再根据需要做1-3个标曲，每个标曲需要6个反应。下表只是以做1个N基因的标曲为例。如果还要做S和E基因的标曲，请参考下表再各设置6各标曲反应：

成分	样品管 N+2个	RT-PCR 阴性对照	标曲样品管（A1-A6）
探针法qRT-PCR缓冲液	各10µL	10µL	各10µL
探针法qRT-PCR酶混合液v2	各2µL	2µL	各2µL
禽流感病毒H5/H7型及新城疫病毒三重RT-PCR引物-探针混合液	各4µL	4µL	各4µL
N+2个待测RNA样本	各4µL	不加	不加
超纯水	不加	4µL	不加
第一步所得标准曲线样品稀释液（A1-A6号）	不加	不加	各4µL

12.盖上盖子后上机，按下面参数进行RT-PCR：

过程	温度	时间
逆转录	50℃	15min
预变性	95℃	10min
PCR反应（40个循环）	95℃	30sec
PCR反应（40个循环）	60℃	60 sec（采集FAM通道、ROX通道和HEX通道的荧光信号，淬灭基团均为TAMRA）

六、数据处理
禽流感病毒H5H7新城疫病毒三重探针法qRT-PCR试剂盒

13. 如果所有标曲扩增或制备阳性对照结果为阴性，则整个扩增或制备实验无效，不需要分析数据，需要重做扩增或制备或跟厂家联系。如果扩增阴性对照或制备阴性对照结果为阳性，说明环境污染，则整个扩增或制备实验无效，不需要分析数据，需要跟厂家联系，购买新的引物和探针。

14. 如果阴性对照和阳性对照正常，则实验有效，可以进入后续分析。

15. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，分别以阳性对照（FAM通道、HEX通道和ROX通道）的Ct值为纵轴，绘制标准曲线，阳性对照的标准曲线为斜线，r2必须大于0.95。再以待测样品的Ct值从阳性对照的标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值，再推算出其浓度。

16. 对定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照FAM、ROX及HEX通道的Ct必须大于或等于40。禽流感病毒H5型阳性对照FAM通道的荧光信号必须有对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于35。对待测样品，如果其FAM通道的Ct大于或等于40则为禽流感病毒H5型阴性，如果小于或等于35则为禽流感病毒H5型阳性。禽流感病毒H7型阳性对照ROX通道的荧光信号必须有对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于35。对待测样品，如果其ROX通道的Ct大于或等于40则为禽流感病毒H7型阴性，如果小于或等于35则为禽流感病毒H7型阳性。新城疫病毒阳性对照HEX通道的荧光信号必须有对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于35。对待测样品，如果其HEX通道的Ct大于或等于40则为新城疫病毒阴性，如果小于或等于35则为新城疫病毒阳性。

自备试剂
样品RNA。

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期1年。

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