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肠出血性大肠杆菌O104H4血清型探针法qLAMP试剂盒
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详细内容
肠出血性大肠杆菌O104H4血清型探针法qLAMP试剂盒
产品特点
肠出血性大肠杆菌O104H4血清型探针法qLAMP试剂盒是肠出血性(Enterohemorrhagic)大肠杆菌的一个菌株,但它有部分肠聚集性大肠杆菌(Enteroaggregative)基因。该菌株导致了2011年O104:H4型大肠杆菌疫情,它分泌的毒素可损伤肠道黏膜,甚至进入血液中破坏红血球,导致溶血性病变,这种症状在肾脏中明显,常导致急性肾衰竭,即为溶血性尿毒综合症,因此对大肠杆菌O104:H4型的快速准确鉴定具有重要意义。为此本公司根据独有的探针法LMAP技术,开发了简单快捷的大肠杆菌O104:H4型LAMP检测试剂盒,它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供DNA样品。
2. 恒温扩增,简单快捷。
3. 含荧光探针,扩增的专一性比染料法和电泳法更强。
4. 检测灵敏性一般比PCR高10倍以上。
5. 一般30分钟内出结果,比PCR快。
6. 引物根据大肠杆菌O104:H4型基因组的保守区设计,不会跟其他生物的DNA发生交叉反应。
7. 上样量大,对20 µL的反应体系,样品加样量高达到14 µL。
8. 内含的dUTP-UNG可防交叉污染。
9. 提供无传染性的阳性对照,便于分析实验结果。
10. 本产品只能用于定性分析,不推荐用于定量分析。
11. 本产品足够50次20 µL体系的探针法LAMP扩增。
12. 只可用于科研。
成分 | 规格 | 包装 |
4×LAMP MasterMix (探针法,待加酶) | 200µL | 0.5mL绿盖管 |
Bst DNA聚合酶2.0 | 50µL | 0.5mL红盖管 |
20×大肠杆菌O104:H4型LAMP引物-探针混合液干粉 | 50次 | 0.5mL白盖管 |
大肠杆菌O104:H4型LAMP阳性对照(1×10E4拷贝/µL) | 250µL | 0.5mL黄盖管 |
超纯水 | 1mL | 1.5mL蓝盖管 |
使用手册 | 1份 | 无 |
注 意:使用前请在20×大肠杆菌O104:H4型LAMP引物-探针混合液干粉中加入55µL超纯水, 涡旋震荡半分钟溶解。没用完的需要放-20℃保存。 | ||
本产品采用5孔盒包装 | ||
一、样品DNA的制备
1. 用自选方法纯化样品DNA,本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容,包括本公司的免提取的核酸释放剂。
2. 如果有N个样品,则需要做N+2个样品制备,包括一个样品制备阳性对照(PC)和一个样品制备阴性对照(NC)。PC用10µL本试剂盒提供的阳性对照(1×10E4拷贝/µL)加一定量的水作为样品制备PC,加水后的总体积跟所用核酸纯化试剂盒所要求的起始样本体积一致。NC用水替代。。

二、LAMP反应(20µL体系)
3. 反应设置:第一次使用时请把所有Bst DNA聚合酶2.0(50µL,本试剂盒提供)加入到 4×LAMP MasterMix(探针法,待加酶)中,轻柔颠倒 20 次充分混匀,然后再取用。如果有N+2个DNA纯化样品,则设置N+4个LAMP扩增,增加LAMP扩增阳性对照和LAMP扩增阴性对照各1个。在N+4个PCR管中加入下列成分:
成分 | N+2 | LAMP | LAMP |
4×LAMP MagicMix(探针法,加酶后) | 各5µL | 5µL | 各5µL |
20×大肠杆菌O104:H4型LAMP引物-探针混合液 | 各1µL | 1µL | 1µL |
N+2个样品DNA | 各14µL | - | - |
超纯水 | - | 14µL | - |
大肠杆菌O104:H4型LAMP阳性对照 (1×10E4拷贝/µL) | - | - | 14µL |
4.置于荧光定量PCR仪中65℃保温60分钟进行扩增,每分钟在FAM通道采集一次荧光信号。
肠出血性大肠杆菌O104H4血清型探针法qLAMP试剂盒
三.结果分析
样品制备阳性对照和LAMP阳性对照的反应液将有标准的S扩增曲线,样品制备阴性对照和LAMP阴性对照的反应液将没呈平线,没有S曲线,否则提取实验或扩增实验无效。如果阳性和阴性对照结果正常,则实验有效,可以分析样品的情况。样品管的荧光曲线为S型,则说明样品为阳性,如果为平线则说明待测样品为阴性。典型的荧光检测结果见下图。左边为阳性,右边为阴性。


自备试剂
待测样品
运输及保存
低温运输,-20℃保存,有效期1年
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