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小反刍兽疫病毒探针法qRT-PCR试剂盒(含内参)

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品牌名称：$brandModel.Title型号：原产地：中国大陆更新时间：2026/10/20 9:24:28

产品摘要：小反刍兽疫病毒探针法qRT-PCR试剂盒(含内参)在分类上属于属副粘病毒科、麻疹病毒属，是单股负链 RNA病毒，基因组大小约为15948 nt。小反刍兽疫主要感染山羊、绵羊等小反刍动物，也可感染猪和牛。

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详细内容

小反刍兽疫病毒探针法qRT-PCR试剂盒(含内参)

产品特点

小反刍兽疫病毒探针法qRT-PCR试剂盒(含内参)在分类上属于属副粘病毒科、麻疹病毒属，是单股负链 RNA病毒，基因组大小约为15948 nt。小反刍兽疫主要感染山羊、绵羊等小反刍动物，也可感染猪和牛。感染小反刍兽疫病毒会引起的山羊和绵羊的急性接触性传染病，临床以发热、口炎、腹泻和肺炎为特征，会造成感染动物大面积死亡，从而给养殖业造成不可避免的损失。因此快速灵敏诊断小反刍兽疫病毒具有重要意义。本产品就是以探针法荧光定量RT-PCR技术为基础开发的专门检测小反刍兽疫病毒的含内参试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。

2. 引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以达到100拷贝/反应。

3. 提供阳性对照，便于制备标准曲线和用作扩增对照，排除假阴性结果。

4. 含识别内源性内参的引物和探针，便于排除RT-PCR假阴性样本。

5. 特异性高，靶分子的引物和探针是根据小反刍兽疫病毒RNA高度保守区设计，不会跟其他生物的RNA发生交叉反应。

6. 既可用于定性检测，又可用于定量检测。定量检测时线性范围至少为5个数量级。

7. 本产品足够50次20 µL体系的探针法RT-PCR反应。

8. 本产品只能用于科研。

参数规格

成分	规格	包装
探针法qRT-PCR 缓冲液	500µL	0.5mL蓝盖管
探针法qRT-PCR酶混合液v2	50µL	0.5mL红盖管
荧光PCR专用模板稀释液	1mL	1.5mL绿盖管
小反刍兽疫病毒RT-PCR引物-探针干粉（含内参引物探针）	50次	0.5mL棕色管
小反刍兽疫病毒RT-PCR阳性对照(1E7拷贝/µL)	50µL	0.5mL黄盖管
使用手册	1份	无
本产品采用五孔盒包装
注意：引物-探针干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入220 µL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。

使用方法
一、稀释标准曲线样品（以阳性对照1E1-1E6拷贝/µL这6个10倍稀释度为例）。

1. 标记6个离心管，分别为6、5、4、3、2、1。

2. 在各管中加入45 µL荧光PCR专用模板稀释液。

3. 在6号管中加入5 µL 1E7拷贝/µL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1E6拷贝/µL的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头，在5号管中加入5 µL 1E6拷贝/µL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1E5拷贝/µL的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头，在4号管中加入5 µL 1E5拷贝/µL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1E4拷贝/µL的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线阳性样品。放冰上待用。

小反刍兽疫病毒探针法qRT-PCR试剂盒(含内参)
二、样品RNA的制备

7. 如果有N个样品，设置N+2个提取，多出的一个是制备PC（样品制备阳性对照），一个是制备NC（样品制备阴性对照）。可以用确认是阳性的样本作为阳性对照，用确认是阴性的样本作为阴性对照。

8. 用自选方法纯化样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数RNA提取试剂盒兼容，也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。

三、Probe qRT-PCR反应（20 µL体系，在样品制备室进行）

9. 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于RT-PCR阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复，则标记N+4个RT-PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于RT-PCR阴性对照（用水做模板），1个用于RT-PCR阳性对照（直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。

10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复）：

成分	样品管 N+2个	RT-PCR 阴性对照	标准曲线样品管 (1-6管）
探针法qRT-PCR缓冲液	各10µL	10µL	各10µL
探针法qRT-PCR酶混合液v2	各1µL	1µL	1µL
小反刍兽疫病毒PCR引物-探针混合液(含内参引物和探针)	各4µL	4µL	各4µL
N+2个待测样（含内源性内参）	各5µL	不加	不加
超纯水	不加	5µL	不加
第6步所得标准曲线样品稀释液（1-6号）	不加	不加	各5µL

11.盖上盖子后上机，按下面参数进行RT-PCR：

过程	温度	时间
逆转录	50℃	10min
预变性	95℃	4min
RT-PCR反应（40个循环）	95℃	15sec
RT-PCR反应（40个循环）	60℃	45 sec（采集FAM通道和HEX通道的荧光信号，淬灭基团均为BHQ）

小反刍兽疫病毒探针法qRT-PCR试剂盒(含内参)
四、数据处理

12. 阴性阳性判断：没有Ct读数，或Ct大于40判为阴性结果。有Ct读数，Ct值小于40，荧光信号有对数增长，有典型扩增曲线判为阳性结果。每个样本需要对FAM通道和Cy5通道的结果分别进行判定，得到两个结果。

13. 实验有效性判断：如果扩增阳性对照或制备阳性对照FAM通道结果为阴性则整个实验无效，不需要分析数据，需要分析原因，可能是操作、仪器和试剂三方面的原因，重做扩增或制备或跟仪器和试剂厂家联系。如果扩增阴性对照或制备阴性对照FAM通道结果为阳性，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析数据，需要分析失败原因，直到污染消除。如果阳性对照和阴性对照正常，则进入下一步分析样本的有效性。

14. 样本有效性判断：如果样本FAM通道的结果为阳性，则无论内参通道的结果是阴性还是阳性，样本的结果均有效。如果样本结果为阴性，内参通道结果也为阴性，则此样品的阴性结果无效。此样品需要重新提取核酸和进行扩增。

15. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，分别以阳性对照FAM通道和内参通道的Ct值为纵轴，绘制标准曲线，阳性对照FAM通道读数的标准曲线为斜线，r2必须大于0.95，内参通道读数的标准曲线为一条跟X轴平行的横线。再以待测样品的Ct值从阳性对照FAM通道读数的标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值，再推算出其浓度。

16. 如果用于定性实验，对待测样品，如果其FAM通道的Ct没有读数、或Ct大于或等于40则均为阴性，如果小于40则为阳性。对任何FAM通道结果为阴性的待测样本，如果其对应的内参通道也为阴性，则此样品的阴性结果无效，此样品需要重复实验。

自备试剂
样品RNA

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期2年

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