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人低密度脂蛋白受体(LDLR)Elisa试剂盒
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详细内容
人低密度脂蛋白受体(LDLR)Elisa试剂盒:如需产品详细说明书请联系我们免费索取
检测原理如下
试剂盒采用双抗体夹心法原理:将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及校准品中待测物,加入辣根过氧化物酶标记的酶标二抗,结合形成“抗体-抗原-抗体-HRP”免疫复合物,加入TMB显色后,若样本中有待测物则显蓝色,加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在450 nm处测OD值,颜色的深浅和样品中的待测物含量呈正比,通过绘制标准曲线计算出样本中待测物的浓度。
包含的实验材料实验材料
名 称 组成成分
酶标板 预包被捕获抗体的酶标板
校准品(10×) 待测物
酶标抗体(100×) 100倍浓缩HRP酶标记的检测抗体
通用稀释液(20×) 样品/校准品/酶标抗体通用稀释液
浓缩洗液(20×) 20倍浓缩洗液
显色剂 TMB、过氧化氢
终止液 稀硫酸
如需单独采购通用型组分,请提供对应的组分名称。
人低密度脂蛋白受体(LDLR)Elisa试剂盒实验步骤
使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右,也可置于37℃温箱快速回温至室温。
注意:酶标板未恢复室温前,请勿开封。
编号 检测试验需设置校准品孔、样品孔,合理规划各样本的排布。
稀释加样 校准品孔:每孔加入校准品100uL,(S0-S7,共8个浓度)。
样品孔:每孔加入样品稀释液80uL,再加入样品20uL。
测细胞:每孔加入细胞上清100uL。
温育 盖上封板膜,在37℃下孵育60分钟
洗板 洗板3次,一次洗板后倒扣酶标板,在干净的吸水纸上拍去残液。
加酶 每孔加入100µL酶标抗体工作液。
温育 盖上封板膜,在37℃下孵育60分钟。
洗板 洗板5次,一次洗板后倒扣酶标板,在干净的吸水纸上拍去残液。
显色 每孔加入显色剂100uL,37℃避光显色15分钟。
终止 每孔加终止液 50uL。
测定 使用酶标仪在450nm检测波长及620~690nm参比波长条件下测定吸光度值,如果没有参比波长则仅选择450nm波长进行检测。如果最高浓度校准品OD值过高,应立即在405/630nm双波长条件下检测。
1、样品稀释液50uL,加样品50uL样品稀释倍数为2倍。
2、样品稀释液80uL,加样品20uL,则稀释倍数为5倍。
3、如样本珍贵量少,可适当加大稀释倍数,应当进行预实验确定最佳稀释倍数。
试剂的准备及储存
1×洗液的配制:浓缩洗液(20×)如有晶体析出,需在37℃下加热至晶体全部溶解后使用。用蒸馏水1:20稀释,例如:10mL浓缩洗涤液加入190mL的蒸馏水,混合均匀。
1×通用稀释液的配制:用蒸馏水1:20稀释,例如:10mL的20×浓缩通用稀释液加入190mL的蒸馏水,混合均匀。
1×酶标抗体工作液的配制:100×酶标抗体用“1×通用稀释液”按1:100倍稀释,例如:10uL的(100×)酶标抗体加入990uL的“1×通用稀释液”,混合均匀。配制好的1×酶标抗体工作液可以在2~8℃保存8h。
· 工作校准品的配制:校准品开封前应离心30秒,确保所有校准品集中于底部;
准备7个离心管,将10×校准品按需吸取一定量用“1×通用稀释液”稀释10倍配制成校准品S1。例:50uL的10×校准品+450uL的“1×通用稀释液”,制备得到500µL的S1浓度校准品。在随后的6个离心管中分别加入250µL的“1×通用稀释液”,在这6个试管中(S2~S7)将S1校准品依次倍比稀释6个梯度至S7,共配制7个浓度的校准品,依次为:S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7,如随货说明书中图所示,“1×通用稀释液”作为零浓度校准品S0,共8支校准品。
人低密度脂蛋白受体(LDLR)Elisa试剂盒结果计算
双波长检测结果无需进行调0,可直接进行标曲拟合及结果计算。
以下曲线拟合方式均可使用,选择拟合后r值最佳的拟合方式进行结果计算。
l 四参数逻辑(4-P)曲线拟合:以浓度值为横坐标,吸光度值为纵坐标;
l 多项式曲线拟合:2次多项式、3次多项式;
l 双对数直线拟合:以浓度值取对数,吸光度值取对数后,进行直线拟合;
l 点对点拟合:各相邻点之间分别单独进行线性拟合,分段计算;
推荐使用专业化软件进行结果拟合和计算,如ELISACALC、SPSS、Graphpad Prism等。
最终样本浓度应乘上样本的稀释倍数。
曲线拟合方式示例图,以下数据和曲线仅供示例,与本试剂盒测定结果无关。
检测的局限性
样本浓度超出检测范围上限时,应当进行适当加大稀释倍数后再次检测,计算结果应当乘上稀释倍数。样本浓度低于LOQ定量限时,检测结果无法进行准确定量。
产品性能指标
以下结果基于校准品的浓度值实验得出,未纳入基质效应等其他因素的潜在影响。
精密度:板内精密度CV<10%(N=20),板间精密度CV<15%(N=20)。
特异性(Analytical specificity):其他相关因子在稀释缓冲液中测定,没有观察到明显的交叉反应。
如需更多Elisa试剂盒或详细说明书可联系我们索取:人低密度脂蛋白受体(LDLR)Elisa试剂盒
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