使用说明

1. DNA样本处理、反应体系配制、核酸扩增和结果鉴定等各步骤应分域进行，以避免交叉污染。

2. 细菌基因组DNA可使用市售试剂盒提取，也可按以下方法快速制备：

1. 从平板上挑取适量菌落，加入含有200µL ddH₂O的灭菌离心管中，涡旋震荡混匀，肉眼可见菌液浑浊即可。

2. 菌液煮沸10 min，冷却至室温后，13,000 rpm离心2 min。

3. 将上清移至新离心管中，即得可用于本试剂盒检测的细菌DNA模板。

1. PCR反应液配制：

2 X Master Mix10 µL

Primer Mix4 µL

阳性对照/样品DNA2 µL

H₂O4µL

反应终体积20 µL

1. PCR反应条件：

95^oC 预变性6min

95 ^oC 变性30sec

30个循环59 ^oC 复性30 sec

72 ^oC 延伸30 sec

72 ^oC 延伸 7min

1. 琼脂糖凝胶（2%）电泳检测15µL PCR扩增产物 (100 V，50 min)。5种弯曲菌属细菌的检测结果如下图所示，其中23S rRNA作为扩增反应的内参照，在所检测的5种弯曲菌属细菌均应可见其大小为650 bp的扩增片段。阳性对照应可见6条大小不同的扩增片段。