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技术文章

实时荧光定量PCR仪的操作步骤

点击次数:1592 发布时间:2025/10/31 9:16:21

实时荧光定量pcr仪是用于荧光测量的仪器,采用侧边荧光采集方式,6个荧光通道同时采集,5S内可完成96个样本6个荧光通道的检测,大大节约检测时间。本产品具有强大的软件及硬件功能,满足多场景客户使用需求。

产品特点:

荧光信号强、背景噪声低,灵敏度高。

5S内完成96个样本所有荧光通道的检测。

采用LED光源设计,节能环保,使用寿命长,免维护。

自动出仓功能,可与自动化工作站配合使用,工作效率高。

PC端操作,一台电脑可控制多台仪器,可随时运行多组实验。

软件分析功能强大,可以进行定性/定量分析、HRM、基因分型等。

实验前准备:

‌耗材选择‌:根据仪器型号选择适配的八连管、96孔板或384孔板,需提前确认仪器配置‌。

‌试剂准备‌:将qPCR预混液、模板DNA、引物、无酶水等试剂置于冰盒上,并放入生物安全柜中‌。

‌仪器检查‌:开机后输入密码,待自检完成(指示灯变绿)后启动软件‌。

反应体系配置:

‌混合试剂‌:按说明书计算用量,将预混液、无酶水、引物加入Ep管中,颠倒混匀‌。

‌加样‌:将混合液加入八连管左侧两列,模板加入右侧,每种浓度设两个平行‌。

‌离心‌:盖紧管盖后瞬时离心,确保溶液混合均匀‌。

仪器上机操作:

‌装载样本‌:弹出仪器托架,将八连管或96孔板放入(八连管需适配器),注意对称平衡放置‌。

‌设置程序‌:

选择实验类型(如SYBR Green)‌。

设置温度程序(如预变性95℃ 30s,扩增阶段95℃ 5s、60℃ 30s,循环40次)‌。

确认热盖温度、反应体系体积(如20μL)‌。

‌启动运行‌:保存程序后开始实验,过程中勿拉动反应舱‌。

结果分析:

‌数据采集‌:程序结束后自动生成扩增曲线和熔解曲线,需检查曲线是否平滑、复孔结果是否均一‌。

‌阈值调整‌:若为定性实验(如病毒检测),需设置阴性/阳性对照,并手动调整阈值以提高准确性‌。


注:文章来源于网络,如有侵权,请联系删除

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