【实验目的】

1． 学习离体蛙心的灌流方法。

2． 观察钠、钾、钙三种离子以及肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏活动的影响。

【实验原理】

作为蛙心起搏点的静脉窦能按节律自动产生兴奋。因此，只要将离体失去神经支配的蛙心保持在适宜的环境中，在时间内仍能产生节律性兴奋和收缩活动；另一方面，心脏正常的节律性活动有赖于内环境理化因素的相对稳定，所以改变灌流液的成分，则可以引起心脏活动的改变。

【实验对象】

蟾蜍。

【实验器材】

蛙类解剖手术器材、蛙钉、蛙板、林格液、滴管、蛙心夹、蛙心插管、微调固定器、铁支架、滑轮、搪瓷杯、缝线、张力换能器、培养皿、ZL-620生物信号采集处理系统。0.65%NaC1、2%CaCl2、1%KCl、1：10000肾上腺素溶液和1：10000乙酰胆碱溶液。

【方法和步骤】

1．离体蛙心制备

（1）取蟾蜍一只，捣毁脑和脊髓，将其仰卧固定于蛙板上。从剑突下将胸部皮肤向上剪开（或剪掉），然后剪掉胸骨，打开心包，暴露心脏（图2-12-1）。

图2-12-1 蛙心各部分组成示意图

（2）在主动脉干下方穿2根线。一条在左主动脉上端结扎作插管时牵引用，另一根则在动脉圆锥上方系一松结，用于结扎和固定蛙心插管。

（3）左手持左主动脉上方的结扎线，用眼科剪在松结上方左主动脉根部剪一小斜口，右手将盛有少许林格液的大小适宜的蛙心插管由此剪口处插入动脉圆锥。当插管冰到达动脉圆锥时，再将插管稍稍后退，并转向心室中间方向，在心室收缩期插入心室（图2-12-2）。蛙心插管是否进入心室，可根据插管内林格液的液面是否能随心室的舒缩而上下波动来判断。如蛙心插管已进入心室，则将预先准备好的检结扎紧，并固定在蛙心插客的侧钩上，以免蛙心插管滑出心室。剪断主动脉左右分支。

图2-12-2 插管插入心室示意图

（4）轻轻提起蛙心插管以抬高心脏，用一根线在静脉窦与腔静脉交界处做一结扎，结扎线应尽量下压，以免伤及静脉窦。在结扎线外侧剪断所有组织，将蛙心游离出来。

（5）用新鲜林格液反复换洗蛙心插管内含血的林格液，直至蛙心插管内无血液残留为止。此时离体蛙心已制备成功，可供实验。

2．实验装置

（1）按图2-12-3将蛙心插管固定在铁支架上，用蛙心夹在心室舒张期夹住心尖，并将蛙心夹的线头通过滑轮连至张力换能器的应变染上，此线应有的紧张度。

（2）按图2-12-3连接线路，张力换能器输出线接一通道（亦可选择其他通道）。

图2-12-3 蛙心灌流仪器连接方法

（3）打开计算机，启动ZL-620生物信号采集处理系统。点击菜单“实验/常用生理学实验”，选择“离体蛙心灌流”。ZL-620放大器和采样参数如表2-12-1所示。

表2-12-1 ZL-620放大器和采样参数表

3．实验观察

（1）描记正常的蛙心搏动曲线，注意观察心中频率、心室的收缩和舒张幅度。

（2）把蛙心插管内的林格液全部更换为等量的0.65%NaCl溶液，观察心脏活动及曲线变化。当效应明显时应及时吸出灌流液，用新鲜林格液反复换洗数次，待曲线恢复正常后做下一步。

（3）滴入2%CaCl2溶液1~2滴，观察及换液方法同上。

（4）滴入1%KCl溶液1~2滴，观察及换液方法同上。

（5）滴入1：10 000的肾上腺素溶液1~2滴，观察及换液方法同上。

（6）滴入1：10 000的乙酰明碱溶液1~2滴，观察方法同上。

【注意事项】

1． 制备蛙心标本时，勿伤及静脉窦。

2． 上述各实验项目一旦出现作用应立即用新鲜林格液换洗，以免心肌受损，而且须待心跳恢复正常后方能进行下一步实验。

3． 蛙心插管内液面应保持恒定，以免影响结果。

4． 滴加药品和换取新鲜林格液，须及时做标记，以便观察分析。

5． 吸新鲜林格液和吸蛙心插管内溶液的吸管应区分用，不可混淆使用。同时，吸管不能接触蛙心插管壁，以免影响实验结果。

6． 化学药作用不明显时，可再适量滴加，密切观察药剂量添加后的实验结果。

【实验结果】

将实验结果打印输出，并加注说明。

【思考题】

1． 上述各种因素对心脏收缩活动有什么影响？为什么？

2． 林格液何以能维持蛙心搏动？哺乳动物心脏离体后是否也能搏动？