利用 SpectraMax Paradigm 多功能检测平台同时进行细胞凋亡和细胞坏死的筛选工作
发布时间：2021/8/3 11:16:01关注度：3104
简介：
细胞凋亡和细胞坏死的本质均为细胞死亡， 但我们可以通过其发生机制和病理形态学方面所表现出的特征加以区别。 细胞凋亡指的是细胞程序性的死亡， 不会发生细胞膜损伤， 细胞坏死则被认为是因病理而产生的被动死亡，会伴随发生细胞膜损伤，导致细胞质因子的释放并引起炎症反应。进行抗肿瘤药物筛选过程中，区分引起的是细胞调亡和细胞坏死变得非常重要， 因为后者的主要副作用是引起细胞的炎症反应。这里我们介绍了利用 SeptraMax Paradigm（ MolecularDevices）和 Vybrant 凋亡检测试剂盒（Invitrogen）进行这方面的研究。
试验描述：
Vybrant 细胞凋亡检测试剂盒是基于 Annexin V 和 Sytox Green 两种标记物的基础上开发出的，可以快速和简便的区分肿瘤细胞的凋亡和坏死情况， Annexin V 一种人类血管抗凝剂，标记有藻红蛋白（R-PE）后通常用来检测凋亡细胞的发生，其工作原理是正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双分子层的内侧， 当细胞发生凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧， Annexin V 是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸具有高度的亲和力。相反， Sytox Green 染料不能渗透进入活细胞和凋亡细胞，但可以进入坏死细胞并对其细胞核进行染色，发出很强的绿色荧光。我们提将肿瘤细胞种在 384 孔板中， 然后分别使用肿瘤坏死因子（TNF）和更生霉素（Actinomycin-D） 来诱导细胞凋亡，使用聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)诱导细胞坏死。此外，我们可通过检测细胞组织表达的不同物质其抗肿瘤特性和分化特性来区分细胞凋亡和细胞坏死。
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原创作者：美谷分子仪器（上海）有限公司
第7年
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