近年来，将体外肿瘤细胞聚集物作为模拟体内组织环境模型的技术得到了重大的突破。该项技术能够使种植在低吸附圆底孔板中离散的细胞聚集成球体。而球体被认为能够比常规的二维 (2D) 细胞培养更有效地模拟肿瘤行为。因为与肿瘤实体类似，3D 细胞球也包含暴露在球面的细胞和深埋在球内的细胞、都含有增殖和非增殖的细胞，并且球体中心是一个缺氧环境。越来越多的实例已成功地将这种三维球体模型用于各种用途的化合物筛选，以研究潜在的癌症疗法。然而要获得这类 3D 球体分析的kekao方法时，是具有挑战性的：
• 定位聚焦在一个视野中即可看到完整的球体，以便对每个孔进行批量成像。
• 优化化合物和染色处理，确保染料渗透效果，避免干扰球体的位置。
• 在整个 3D 结构中获取具有代表性的图像，zuida限度地减少成像平面上下的失焦和背景信号。
• 快速分析图像以产生有意义的结果，从中可以得出实验结论。
主要特点
•在 20 倍物镜下只需要一个视野即可获得完整的球体。
•支持在 96 孔板或者 384 孔板中进行 3D 成球实验。
•使用共聚焦成像jingque检测细胞反应。
•可通过只保存 z 平面图像的 2D 投影来节省存储空间。
球体形成和处理
我 们 使 用下 面 的 方 法 来 对 肿 瘤 细 胞 系 HCT116,DU145 和HepG2 进行细胞成球。在 37℃ 和 5%CO2 条件下，细胞在培养瓶中培养。然后消化，并使用含有适当浓度胎牛血清的细胞培养基重悬细胞。然后以每孔 1000-1500 个细胞的浓度将细胞悬液铺设在 96 孔或 384 孔 U 型底的黑边底透板中，可使用 Corning 4520 和 3830 两种型号的板材。培养 24 小时后，每孔底部细胞开始形成单一的球体。继续在 37℃ 和 5%CO2 条件下连续培养细胞 2-4 天，直至细胞球尺寸符合实验要求 ( 图 1 )。球体可以培养更长的时间，但球体过大会阻碍染色渗透，以致中心细胞无法成像。
本应用手册描述了用于测定抗癌化合物 ( 依托泊苷、紫杉醇和丝裂霉素 C ) 效果的分析方法。球体处理过程先在孔中加入浓度为 10 倍的化合物，然后孵育 1-4 天，这取决于所研究的药物作用机理。较短的药物作用时间用于研究细胞凋亡，较长的药物作用时间用于多参数细胞毒性研究。对于超过 2 天的药物处理，化合物以 1 倍浓度每 2 天更换一次。
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原创作者：美谷分子仪器（上海）有限公司
第7年
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