目的
这篇技术说明是为了帮助用户建立佳的荧光偏振检测方法，引导如何将现有的多种测定方法转换为可靠、灵敏的荧光偏振检测。在本文中，我们以常见的竞争性结合实验——受体和配体结合实验为例来说明这个问题。设计 FP 受体 - 配体结合测定应考虑的。
要点
1.大限度地增大示踪剂和受体之间的尺寸差异。 当使 用常见的荧 光 染 料如 荧 光 素、Texas Red、Cy5、BODIPY 等，示踪剂的大小应小于 10kd，与肽相当，而受体大小应为 50kd 或者更大。通常认为，两者之间10 倍的分子量差异是比较好的。不过，如果不满足这些标准也可以尝试开展结合实验的评估，毕竟初的FP 实验工作是使用白蛋白 (60 kD) 和抗体 (160 kD) 获得了可发表的结果。
2.尽量减少其它检测材料对非特异性荧光偏振的影响。品质因素包括示踪剂的纯度，受体的纯度，缓冲液固有的荧光以及缓冲液组分如载体蛋白与示踪剂结合的能力。一些微孔板的材料如聚苯乙烯能够结合游离示踪剂，从而增加总化，可使用非结合表面的微孔板来解决这个问题。
2a.示踪剂应该大于 90% 的标记比率。 高百分比的未能标记的示踪剂意味着未标记的示踪剂将竞争受体，从而改变表观 IC50 ( 相互作用的表观亲和力，从而影响 IC50 的计算值 )。同样，无法从示踪剂中纯化出游离荧光基团意味着增加的总荧光部分将无法改变其偏振态。
2b.使用高度提纯的受体。 由于大蛋白，细胞膜和细胞碎片会散射光，导致总化净增加，因此应尽量减少这些杂质。适当的背景扣除可以对它们进行部

原创作者：美谷分子仪器（上海）有限公司