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大鼠转化生长因子β2(TGFβ2)ELISA试剂盒实验使用说明书
点击次数: 21发布时间:2025/7/10 9:27:49
- 上 传 者: 本生(天津)健康科技有限公司
- 上传时间: 2025/7/10 9:27:49
- 文件大小: KB
- 文件类型: doc
- 所属分类: 应用方法
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资料简介: 大鼠转化生长因子β2(TGFβ2)ELISA试剂盒实验使用说明书 BS-2889大鼠转化生长因子β2(TGFβ2)ELISA试剂盒 一、试剂盒组成与保存条件 大鼠转化生长因子β2(TGFβ2)ELISA试剂盒通常包含以下主要组分: 预包被微孔板(8×12 strips或8×6) TGF-β2标准品(冻干粉,通常浓度为10,000pg/mL) 生物素标记的检测抗体(120μL/70μL) HRP标记链霉亲和素(120μL/70μL) TMB显色液(10mL/6mL) 终止液(2M H₂SO₄,10mL/6mL) 洗涤缓冲液(20×浓缩液) 样本稀释液 标准品稀释液 保存条件:未拆封试剂盒应4℃保存;拆封后,标准品需-20℃保存,其他组分4℃保存 二、实验前准备 1. 样本处理 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,2000-3000转/分离心20分钟,仔细收集上清,如出现沉淀应再次离心 血浆:选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后离心(2000-3000转/分,20分钟),收集上清 细胞培养上清:离心去除颗粒后分装保存于-80℃,避免反复冻融 组织匀浆:按重量体积比1:9加入PBS匀浆,离心后取上清 2. 试剂平衡 所有试剂及样本需室温(18-25℃)平衡30分钟,避免37℃直接溶解 3. 标准品配制 复溶标准品后,用稀释液梯度稀释至5,000pg/mL→78pg/mL(7个浓度点),0pg/mL为空白对照 三、实验步骤(双抗体夹心法) 加样:每孔加入100μL标准品或样本,37℃孵育90分钟 洗涤:弃液后用PBST洗涤液洗板5次,每次拍干 加检测抗体:每孔加100μL生物素化抗体(1:100稀释),37℃孵育60分钟 加酶结合物:加入HRP标记链霉亲和素(1:100稀释),37℃避光孵育30分钟 显色:加TMB显色液100μL/孔,避光反应15-20分钟(显蓝色) 终止与读数:加50μL终止液(变黄色),10分钟内在450nm波长测OD值(参考波长570-630nm) 四、数据分析 标准曲线绘制:以标准品浓度为横坐标,OD值为纵坐标,拟合四参数逻辑曲线(R²>0.99) 样本浓度计算:根据样本OD值从曲线反推浓度,超出范围需稀释后重测 质量控制:批内CV应<10%,批间CV<12% 五、注意事项 安全防护: 避免直接接触终止液和底物A、B,一旦接触尽快用水冲洗 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品 禁止用嘴吸取试剂盒任何成分 操作要点: 试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温 实验中不用的板条应立即放回包装袋密封保存 避免细菌污染、反复冻融或剧烈震荡 一次加样时间控制在10分钟内,样本多时推荐使用多道移液器 干扰因素: 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制HRP活性 避免溶血或脂血样本影响检测结果 结果判读: 反应孔内颜色越深,阳性程度越强 阴性反应为无色或极浅,可用"+"、"-"号表示 也可测OD值:若大于阴性对照OD值的2.1倍即为阳性 六、技术参数 灵敏度:通常 注:以上资料仅供参考,具体请咨询技术老师或品牌供应商。 天津本生一直视质量控制为企业的生命,追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承:遵纪守法,严于律己,宽仁以待,敢于承担的企业精神作为标准,以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场,较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢,是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作,共创美好的未来。
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